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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] β-hemoglobinopathies are severe genetic disorders characterized either by the abnormal synthesis of the adult β-globin chains of the hemoglobin (Hb) tetramer (βS-globin chains) in sickle cell disease (SCD) or by the reduced β-globin production in β-thalassemia. The identification and quantification of globin chains are crucial for the diagnosis of these diseases and for testing new therapeutic approaches aimed at correcting the β-hemoglobinopathy phenotype. Conventional techniques to detect the different Hb molecules include cellulose-acetate electrophoresis (CEA), capillary electrophoresis (CE), isoelectric focusing (IEF), and cation-exchange-HPLC (CE-HPLC). However, these methods cannot distinguish the different globin chains and precisely determine their ...
[摘要] [摘要] β-血红蛋白病是严重的遗传性疾病，其特征在于或者由血红蛋白的β成人珠蛋白链的合成异常血红蛋白（Hb）四聚体（β小号球蛋白链）的镰状细胞病（SCD）或通过减少β- β地中海贫血中球蛋白的产生。珠蛋白链的鉴定和定量对于这些疾病的诊断和测试旨在纠正β-血红蛋白病表型的新治疗方法至关重要。检测不同Hb分子的常规技术包括醋酸纤维素电泳（CEA）， 毛细管电泳（CE），等电聚焦（IEF）和阳离子交换HPLC（CE-HPLC）。但是，这些方法无法区分不同的球蛋白链，无法精确确定它们的相对表达。我们已经建立了高分辨率和可再现的反相HPLC（RP-HPLC），以基于其不同的疏水特性来检测和鉴定组成血红蛋白四聚体的球蛋白链。RP-HPLC流动相由产生疏水环境的乙腈（ACN）和三氟乙酸（TFA）组成，后者破坏Hb四聚体中的血红素基团并释放出单独的球蛋白链。将含Hb的裂解物上样到Aeris TM 3.6 µm WIDEPORE C4 200ÅLC色谱柱上，随着时间的流逝疏水性梯度的增加，可以进行珠蛋白链分离。球蛋白链的相对量在220nm的波长（λ）下测量。该协议被设计用于（i）从人外周血获得的红血细胞（红细胞），（II）评价红细胞珠蛋白链在体外从造血干细胞分化的/祖细胞（HSPC的），和（iii）脉冲串形成单位- è ...
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