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Date:
2021-01-20
[Abstract] Research on cell migration and interactions with the extracellular matrix (ECM) was mostly focused on 2D surfaces in the past. Many recent studies have highlighted differences in migratory behaviour of cells on 2D surfaces compared to complex cell migration modes in 3D environments. When embedded in 3D matrices, cells constantly sense the physicochemical, topological and mechanical properties of the ECM and adjust their behaviour accordingly. Changes in the stiffness of the ECM can have effects on cell morphology, differentiation and behaviour and cells can follow stiffness gradients in a process called durotaxis. Here we introduce a detailed protocol for the assembly of 3D matrices consisting of collagen I/fibronectin and embedding cells for live cell imaging. Further, we will show how ...
[摘要] [摘要]细胞迁移及其与细胞外基质（ECM）相互作用的研究最多过去专注于2D曲面。最近的许多研究都强调了与3D环境中复杂的细胞迁移模式相比，2D表面上的细胞迁移行为的差异。当嵌入3D矩阵中时，细胞会不断感知ECM的物理化学，拓扑和机械特性，并相应地调整其行为。ECM刚度的变化会影响细胞的形态，分化和行为，并且细胞会在称为durotaxis的过程中遵循刚度梯度。在这里，我们介绍了由胶原蛋白I /纤连蛋白和包埋细胞组成的3D矩阵的详细协议，用于活细胞成像。此外，我们将展示如何通过非酶糖基化来增强基质，以及用荧光染料对胶原蛋白进行染色如何使基质和细胞同时成像。该方法可用于在具有不同刚度的3D微环境中对细胞迁移进行成像，定义细胞-基质相互作用以及细胞对变化的ECM的反应，并可视化细胞的基质变形。
[背景]细胞和依赖于动态周围的细胞外基质（ECM）生成的功能性实体的调整两者的，基质和细胞，以预防疾病。多年来，人们一直认为ECM仅为嵌入式细胞提供结构支持。但是，最近的研究突出了ECM的关键功能，而不是其脚手架功能。ECM的修饰已与疾病进展相关，尤其是在癌症的背景下，与转移的发生有关，以及与临床预后和患者生存的相关性。
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