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Date:
2021-01-20
[Abstract] Small GTPases are cellular switches that are switched on when bound to GTP and switched off when bound to GDP. Different small GTPase proteins or those with mutations may bind to GTP or GDP with different relative affinities. However, small GTPases generally have very high affinities for guanine nucleotides, rendering it difficult to compare the relative binding affinities for GTP and GDP. Here we developed a method for comparing the relative binding strength of a protein to GTP and GDP using a mant-GDP dissociation assay, whereby the abilities of GTP and GDP to induce the dissociation of bound mant-GDP are compared. This equilibrium type assay is simple, economic, and much faster than obtaining each protein’s affinity for GDP and GTP. The GDP/GTP preference value obtained is useful ...
[摘要] [摘要]小型GTPases是蜂窝交换机，绑定到GTP时打开，绑定到GDP时关闭。不同的小GTPase蛋白或具有突变的蛋白可能以不同的亲和力与GTP或GDP结合。然而，小的GTP酶通常具有非常高的鸟嘌呤核苷酸亲和力，使得难以比较GTP和GDP的相对结合亲和力。在这里，我们开发了一种方法，使用以下方法比较蛋白质与GTP和GDP的相对结合强度 mant-GDP解离分析，比较了GTP和GDP诱导绑定的mant-GDP解离的能力。这种平衡类型测定简单，经济并且比获得每种蛋白质对GDP和GTP的亲和力要快得多。Ť他GDP / GTP偏好值获得是用于比较的相对GTP有用/ GDP结合偏好小号不同GTP酶或不同的突变体，尽管这不是真正的GDP / GTP亲和力比（而是比的估计）。
[背景]小GTP酶（也称为小G蛋白）是一组功能上重要的大分子，由于其固有的水解酶活性，它们可以与GTP结合并水解为GDP 。在人类，米矿比一百种不同的小GTP酶分为五个家庭，即RAS，卢，冉，拉布和Arf的，根据其序列，结构，和功能（Wennerberg等，2005） 。
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