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Date:
2021-01-20
[Abstract] This protocol describes the generation of protoplasts from protonemal tissue of the moss Physcomitrium patens (syn. Physcomitrella patens), using Cellulase ONOZUKA R10 and Macerozyme R10, followed by polyethylene glycol (PEG) mediated transformation. The protonemal tissue grown in liquid suspension was harvested and treated with enzyme cocktails mix of 1.5% Cellulase ONOZUKA R10 and 0.5% Macerozyme R10 to generate 1,8 million protoplasts within 3 h.
[摘要] [摘要]该方案描述从苔藓原丝体的原生质体组织的生成Physcomitrium藓（同义词小立碗藓），使用纤维素酶Onozuka R 10和离析酶R10，随后聚乙二醇（PEG）介导的转化。收获在液体悬浮液中生长的原质组织，并用1.5％Cellulase ONOZUKA R10和0.5％Macerozyme R10的酶混合物混合处理，在3小时内产生180万原生质体。
[背景]由于其在自然同源性定向修复中的效率，Physcomitrium patens非常适合用作植物实验系统，尤其是用于基因的异源表达，从而可以产生具有可预测特性和特征的转化体。此外，P.patens具有低成本培养的优势，并且可以在生物反应器中大量维护（Reski等人，2018）。的基因工程展叶剑叶藓细胞允许大规模生产天然产物和药物如的毒胡萝卜素和其它萜类的候选药物，这是很难的访问（西蒙森等人，2009） 。该协议显示了如何分离和转化从单倍体原生质丝释放的彭定康原生质体。P. patens已被用于原生质体的产生和PEG介导的转化。在之前的实验protoplastation上展叶剑叶藓中与酶进行崩溃酶从担子菌纲（湾。等2009，;巴赫等人，2014） ...
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