| A Transient Transfection-based Cell Adhesion Assay with 293T Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The in vitro cell adhesion assay is a quantitative method for measuring selective cell adhesion to specific proteins. Traditionally, cell adhesion assays employ purified protein immobilized on a solid glass or plastic surface. Here, we describe a transient 293T cell transfection-based cell adhesion assay to study selective cell adhesion of a specific cell type to a protein of interest. In this protocol, 293T cells are transfected with a mammalian expression plasmid containing mSiglec1 cDNA or an empty plasmid as a mock control and are then cultured to form a monolayer. Subsequently, these Siglec1-expressing and mock-transfected 293T cell monolayers are used for cell adhesion assays with GFP-expressing B16F10 cells. The number of GFP+ cancer cells adhering to each 293T monolayer is a ...
[摘要] [摘要]的体外细胞粘附分析是一种用于测量到特定蛋白选择性细胞粘附的定量方法。传统上，细胞粘附测定采用固定在固体玻璃或塑料表面上的纯化蛋白质。在这里，我们描述了基于瞬时293T细胞转染的细胞粘附试验，以研究特定细胞类型对目标蛋白质的选择性细胞粘附。在该协议中，将293T细胞用包含mSiglec1 cDNA的哺乳动物表达质粒或空质粒作为模拟对照转染，然后培养以形成单层。随后，将这些表达Siglec1和模拟转染的293T细胞单层用于表达GFP的B16F10细胞的细胞粘附测定。GFP +的数量 粘附在每个293T单层上的癌细胞是一种定量手段，用于比较癌细胞与Siglec1的选择性粘附性。该方法消除了表达和纯化目的蛋白以进行体外细胞粘附测定的需要，并且可以容易地用难以纯化的蛋白进行操作，同时保持其天然的原位结构。
关键词：细胞粘附试验，细胞粘附，癌细胞粘附试验，293T，瞬时转染，Siglec1，F荧光显微镜
[背景]细胞-细胞相互作用对于生物学过程，例如组织发育，再生，和临界形态发生，以及免疫应答和癌症转移（Gumbiner，1996 ...
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| A Pulse–chase EdU Method for Detection of Cell Division Orientation in Arabidopsis and Juncus prismatocarpus Leaf Primordia
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] In plants, the morphological diversity of leaves is largely determined by cell division, especially cell division orientation. Whereas cell division itself is easily monitored, the detection and quantification of cell division orientation are difficult. The few existing methods for detection and quantification of cell division orientation are either inefficient or laborious. Here, we describe a pulse-chase strategy using a 5-ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU) labeling assay. Plant tissues are first incubated with EdU for a short period (pulse), followed by a long incubation without EdU (chase). Using this method, the positions of daughter cells are easily detected and can be used to quantify cell division orientation. Our protocol is rapid and very efficient for quantitative analysis of ...
[摘要] [摘要]在植物中，叶片的形态多样性在很大程度上取决于细胞分裂，尤其是细胞分裂方向。尽管细胞分裂本身很容易监测，但是细胞分裂方向的检测和定量却很困难。现有的几种检测和定量细胞分裂方向的方法要么效率低下要么费力。在这里，我们描述了使用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU ）标记测定的脉冲追踪策略。首先将植物组织与EdU一起短时间（脉冲）孵育，然后在没有EdU的情况下长时间孵育（追逐）。使用这种方法，子细胞的位置易于检测，可用于量化细胞分裂方向。我们的协议可以快速有效地定量分析细胞分裂方向，并且可以同时应用于模型植物和非模型植物。
图形摘要：
通过脉冲追逐EdU方法清晰可见的植物细胞分裂对
[背景]植物细胞通过细胞壁彼此附接，并且不能迁移。因此，在叶片发育的早期，组织化，定向的细胞分裂在很大程度上决定了成熟叶片的形状。迄今为止，还没有报道用于有效和快速检测和定量细胞分裂取向的方法。现有方法包括使用ap CYCB1; 1 :: GUS （β-葡萄糖醛酸糖苷酶）报告基因线（末期）可视化子核（末期）（Horiguchi et al。，2011）或使用4'，6-diamidino可视化纺锤状赤道（中期） -2-苯基吲哚（DAPI）染色（Fukushima et ...
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