| Isolation of Murine Primary Aortic Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (VSMCs) have been cultured for decades to study the role of these cells in cardiovascular disorders. The most common source of VSMCs is the rat aorta. Here we show the adaptation of this method to isolate and culture mouse aortic VSMCs. The advantage of this method is that there are many more transgenic mouse lines available compared to rats. The protocol consists of the isolation of the aorta, the liberation of vascular cells by the action of collagenase, culturing of VSCMs, and analyzing filamentous actin and alpha smooth muscle actin by fluorescence microscopy. VSCMs can be further used to study mechanisms underlying cardiovascular diseases.
Graphic abstract
Figure 1. Working steps ...
[摘要] [摘要]血管平滑肌细胞（VSMC）已培养了数十年，以研究这些细胞在心血管疾病中的作用。VSMC的最常见来源是大鼠主动脉。在这里，我们展示了此方法对分离和培养小鼠主动脉VSMC的适应性。这种方法的优点是，与大鼠相比，有更多的转基因小鼠系可用。该方案包括主动脉的分离，通过胶原酶的作用释放血管细胞，培养VSCM ，通过荧光显微镜分析丝状肌动蛋白和α平滑肌肌动蛋白。VSCM可进一步用于研究心血管疾病的潜在机制。
图形摘要：
˚F igure 1.工作步骤
关键词：血管平滑肌细胞鼠主动脉提取分离培养
[背景]血管壁细胞（壁细胞）在多种疾病的调节中起着至关重要的作用，从高血压（Rodríguez-Vita等，2005a）和动脉粥样硬化（Rodríguez-Vita等，2008）到癌症（ Wong等人，2020年），甚至最近还有COVID-19 （He等人，2020年）。毛细血管大部分被周细胞覆盖，而较大的血管在血管壁中含有VSCM。壁细胞通过血管收缩和血管舒张来控制血流。这样，吨哎是在几种药物靶，其降低血压（圣保罗等人，2020） ...
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| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| Non-separate Mouse Sclerochoroid/RPE/Retina Staining and Whole Mount for the Integral Observation of Subretinal Layer
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The subretinal layer between retinal pigment epithelium (RPE) and photoreceptors is a region involved in inflammation and angiogenesis during the procession of diseases such as age-related macular degeneration. The current protocols of whole mounts (retina and RPE) are unable to address the intact view of the subretinal layer because the separation between retina and RPE is required, and each separate tissue is then stained. Non-separate Sclerochoroid/RPE/Retina whole mount staining was recently developed and reported. The method can be further combined and optimized with melanin bleaching and tissue clearing. Here, we describe steps of both non-pigmented and pigmented mouse Sclerochoroid/RPE/Retina whole mount including eyeball preparation, staining, mounting and confocal scanning. In ...
[摘要] [摘要]视网膜色素上皮（RPE）和感光细胞之间的视网膜下层是与年龄相关的黄斑变性等疾病进程中涉及炎症和血管生成的区域。由于需要在视网膜和RPE之间分离，因此整个安装（视网膜和RPE）的当前方案无法解决视网膜下层的完整视图，然后对每个单独的组织进行染色。最近开发并报道了非分离的巩膜脉络膜/ RPE /视网膜整装染色。该方法可以与黑色素漂白和组织清除进一步结合和优化。在这里，我们描述了非色素和色素小鼠硬化脉络膜的步骤/ RPE /视网膜整个安装，包括眼球准备，染色，安装和共聚焦扫描。此外，我们提出了巩膜脉络膜/ RPE /视网膜整个支架中的RPE，视网膜下小胶质细胞和邻近的感光体的共聚焦图像。
[背景]在眼睛视网膜是由视网膜色素上皮（RPE）包围，脉络膜和巩膜。通常，在整装染色中，视网膜组织与脉络膜/ RPE分开，并且分开的视网膜和脉络膜/ RPE的每个部分都被染色。因此，视网膜或脉络膜/ RPE的单独的整体染色不能解决完整的视网膜下信息。最近，开发了脉络膜/ RP E /视网膜整个安装方案（Kim等，2016； ...
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