| Investigate Synaptic Vesicles Mobility in Neuronal Culture Axons by FRAP Imaging
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Synaptic vesicles (SVs) are clustered in the presynaptic terminals and consistently trafficking along axons. Based on their release features, SVs are classified into different “pools”. Imaging of SVs that are traveling among multiple presynaptic terminals has helped define a new pool named “SV super-pool”. Here we describe a Fluorescent Recovery After Photobleaching (FRAP) approach to elucidate the relationship between SVs from the super-pool with SV clusters at presynaptic terminals. This method is powerful to investigate SV mobility regulation mechanisms.
[摘要] [摘要]突触小泡（SVs）聚集在突触前的末端，并沿轴突持续运输。根据其发布功能，SV分为不同的“池”。在多个突触前末端之间传播的SV的成像已帮助定义了一个名为“ SV超级池”的新池。在这里，我们描述了一种光漂白后的荧光恢复（FRAP）方法，以阐明超池中的SV与突触前末端的SV簇之间的关系。该方法对于研究SV迁移率调节机制非常有效。
[背景]突触小泡（SVs）是通过神经递质的储存和释放参与神经传递的关键细胞器。SV大多在邻近突触前末端活动区的簇中识别。在电子显微镜（EM）下，SV具有直径为40-50nm的均匀外观（Landis等，1988； Korogod等，2015）。据我们所知，SV之间没有明显的生化区别。在不同的刺激范式下，它们显示出不同的释放特性。因此，SV被分为不同的功能池：储备池，回收池和易于释放池（图1）（Denker和Rozzoli，2010）。EM深入研究了详细的突触结构，SV定位，SV释放机制。发现SV通过细丝与一个或两个相邻的囊泡相连，突触素被认为是连接器的一部分，并且将SV保持在储备池中（Siksou et al。，2007）。超结构研究也揭示了SV对接和融合的分子步骤的解剖（Imig等人，2014）。SV与质膜的融合将酸性管腔（pH约为5 .0 ...
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| Measuring Extracellular Proton and Anionic Fluxes in Arabidopsis Pollen Tubes
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] The ion-selective vibrating probe has been used to detect and quantify the magnitude and direction of transmembrane fluxes of several ions in a wide range of biological systems. Inherently non-invasive, vibrating probes have been essential to access relevant electrophysiological parameters related to apical growth and morphogenesis in pollen tubes, a highly specialized cell where spatiotemporal tuning of ion dynamics is fundamental. Of relevance, crucial processes to the cell physiology of pollen tubes associated with protons and anions have been elucidated using vibrating probes, allowing the identification of diverse molecular players underlying and regulating their extracellular fluxes. The use of Arabidopsis thaliana as a genetic model system posed new challenges given their ...
[摘要] [摘要]离子选择性振动探针已被用于检测和量化各种生物系统中几种离子的跨膜通量的大小和方向。固有Ñ上侵入性，振动探针已经必需访问有关在花粉管，与心尖生长和形态发生电生理参数高度专业化的细胞，其中离子动力学的时空调谐是根本。与此相关的是，已使用振动探针阐明了与质子和阴离子相关的花粉管细胞生理学的关键过程。 ，可以识别潜在分子并调节其细胞外通量。利用拟南芥作为遗传模型系统所带来的相对赋予了新的挑战LY尺寸小，不易操纵体外。在这里，我们描述了协议优化，该优化使在拟南芥花粉管中使用离子选择性振动探针成为可能，从而确保了一致且可重复的数据。Q这样的定量的方法启用表征离子转运蛋白的突变体表现型，这是不被明显形态学和生殖缺陷直接可检测的，提供了有价值的见解分子和细胞机制。可以将此处详述的用于量化细胞外质子和阴离子通量的方案调整为其他系统和物种，同时将样品制备方法应用于相关技术，从而促进对花粉管生长和发育的研究。
[背景]生物电和离子交换的对活体细胞的相关性是毋庸置疑的，具有一个功能影响的范围内的现象，从图案形成，信令和发展癌症和其他疾病（莱，2014）。多样的技术可以被用于检测动作电位，电场，胞外电流，和离子通量。然而，它们的功能评估在体内需要小号的非侵入性的方法。理想情况下，任何感兴趣的生物系统都应在尽可能少的干扰下和最生理的条件下进行研究。这些标准是由非侵入性的离子选择性振动探头，它已被用于在很宽的测量多个跨膜离子通量达到各种实验系统，包括果蝇（布朗和O'Donnell的，2016），斑马鱼（GUH的等。，2016），小鼠皮肤（孙等人，2015年），根（他等人，2015年），水蚤（Stensberg等，2014），C.线虫（Adlimoghaddam等，2014），等等。在花粉管中，使用离子选择性振动探针定量测量细胞外离子通量对于确定主要离子（尤其是Ca ...
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