{{'Search' | translate}}
 

MF-MilliporeTM 0.45 µm

Company: MF-MilliporeTM
Catalog#: HAWG04700
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Candida albicans Culture, Cell Harvesting, and Total RNA Extraction
Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract]  

Transcriptional analysis has become a cornerstone of biological research, and with the advent of cheaper and more efficient sequencing technology over the last decade, there exists a need for high-yield and efficient RNA extraction techniques. Fungi such as the human pathogen Candida albicans present a unique obstacle to RNA purification in the form of the tough cell wall made up of many different components such as chitin that are resistant to many common mammalian or bacterial cell lysis methods. Typical in vitro C. albicans cell harvesting methods can be time consuming and expensive if many samples are being processed with multiple opportunities for product loss or sample variation. Harvesting cells via vacuum filtration rather than centrifugation cuts down on time before the cells are

...
[摘要]  [摘要]转录分析已成为生物学研究的基石,并且在最近十年中,随着廉价,高效测序技术的出现,对高产量,高效率的RNA提取技术存在着需求。真菌如人病原体白色念珠菌呈现出独特的障碍RNA纯化在坚韧细胞壁的形式作出许多不同的部件,例如几丁质的最多的是对许多常见的哺乳动物细胞或细菌细胞裂解的方法具有抗性。典型的体外白色念珠菌 如果要处理的样品很多,并且产品损失或样品变化的机会很多,则细胞采集方法可能既耗时又昂贵。通过真空过滤而不是离心收集细胞可以减少冷冻前的时间,因此可以改变RNA表达谱的可用时间。对于白色念珠菌而言,真空过滤是优选的,这主要有两个原因:由于暴露的表面积增加,非丸状细胞的细胞裂解速度更快,并且与酵母或细菌细胞不同,丝状细胞首先难以沉淀。与酶法处理相比,使用机械细胞裂解法(通过氧化锆/二氧化硅珠子)可减少加工时间以及总成本。总的来说,该方法是从白念珠菌的体外培养物中提取总RNA的快速,高效且高产率的方法。

[背景]需要快速,可重复的,高效的RNA提取技术已经显著在过去几年里,由于使用RNA测序等表达分析技术的稳步增长成长是变得更加经济实惠,并与测序技术的改进速度更快。各种公司和实验室提供了许多不同的工具包和协议,试图满足这一需求。但是,专门为一种真菌建立的方法可能不适用于另一种真菌,而试剂盒平台由于其应用范围太广,常常会不足。在这里,我们描述了一种细胞培养物,收获,和RNA提取方法为致病性真菌,白色念珠菌,其利用的技术的组合,得到以一致和有效的方式既高产率和高质量的RNA。 ...

Comments