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Date:
2020-10-20
[Abstract] Endocytic trafficking and recycling are fundamental cellular processes that control essential functions such as signaling protein complexes transport and membrane identity. The small GTPase Rabs are indispensable component of the endosomal recycling machinery. The Rabs bind to effectors to mediate their functions, such as protein sorting and degradation, membrane tethering or lipid modification, and organelle motility. Due to the complex and dynamic nature of endosomal compartments and tracking route, detailed multiparametric analyses of three-dimensional data by quantitative methods are challenging. Here, we describe a detailed time-lapse imaging protocol designed for the quantitative tracking of single endosomal vesicles, using GFP-Rab4-positive recycling endosomes. This method permits ...
[摘要] [摘要]内吞运输和再循环是基本的细胞过程，它们控制诸如信号蛋白复合物运输和膜特性等基本功能。小GTPase-Rabs是内质体回收机械中不可缺少的组成部分。Rabs结合效应器介导其功能，如蛋白质的分类和降解，膜栓系或脂质修饰，以及细胞器的运动。由于内体隔室和追踪路线的复杂性和动态性，用定量方法对三维数据进行详细的多参数分析是一项具有挑战性的工作。在这里，我们描述了一个详细的延时成像协议，设计用于定量跟踪单个内囊泡，使用GFP-Rab4阳性循环内体。这种方法允许在三维活体细胞成像中自动跟踪单个内吞小泡，允许研究多个参数，如丰度、速度、方向性、亚细胞定位以及蛋白质共定位。该协议可广泛应用于各种环境下的细胞模型，包括生长因子刺激、基因敲除、药物治疗等，适用于高通量筛选。
[背景] 越来越多的证据强调了在细胞迁移、粘附、形态发生、增殖、胞质分裂以及学习和记忆等不同过程中协调的内质体再循环的重要性（Grant和Donaldson，2009年；Parachoniak和Park，2012年；Wandinger Ness和Zerial，2014年；Zaoui等人，2019a和2019b）. 哺乳动物中有70多种Rab-gtpase，它们在膜转运中具有不同的定位和功能。更复杂的是，虽然大多数Rab-gtpase是普遍存在的，但有些表现出组织特异性表达（van der ...
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