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0.5 M EDTA

Company: Gibco
Catalog#: 15575020
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Generation of Human iPSC-derived Neural Progenitor Cells (NPCs) as Drug Discovery Model for Neurological and Mitochondrial Disorders
Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract]  

The high attrition rate in drug development processes calls for additional human-based model systems. However, in the context of brain disorders, sampling live neuronal cells for compound testing is not applicable. The use of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) has revolutionized the field of neuronal disease modeling and drug discovery. Thanks to the development of iPSC-based neuronal differentiation protocols, including tridimensional cerebral organoids, it is now possible to molecularly dissect human neuronal development and human brain disease pathogenesis in a dish. These approaches may allow dissecting patient-specific treatment efficacy in a disease-relevant cellular context. For drug discovery approaches, however, a highly reproducible and cost-effective cell model is

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[摘要]  [摘要]药物开发过程中的高流失率要求使用其他基于人的模型系统。但是,在脑部疾病的情况下,不适合对活的神经元细胞进行采样以进行化合物测试。人类诱导的多能干细胞(iPSC )的使用彻底改变了神经元疾病建模和药物发现领域。由于基于iPSC的神经元分化方案(包括三维脑类器官)的发展,现在可以在一个碟子中分子解剖人神经元发育和人脑疾病的发病机理。这些方法可以允许在与疾病相关的细胞环境中解剖患者特异性的治疗功效。但是,对于药物发现方法,需要高度可复制且具有成本效益的细胞模型。在这里,我们描述了一种一步-步骤,用于从人产生健壮和可膨胀的神经祖细胞(NPC)工艺的iPSC 。用此协议生成的NPC是同质的且高度增殖。这些功能使NPC适合开发用于药物发现的高通量化合物筛选。人iPSC衍生的NPC示出了代谢依赖于线粒体活性,因此可也用于研究神经病症,其中线粒体功能受到影响。该协议涵盖了制备,培养和表征人iPSC来源的NPC所需的所有步骤。


图形摘要:


示意性的协议的所述发电机密封的离子人类源自iPSC的的NPC

[背景技术]近年来,目标为中心的药物发现的缺点已经用于寻址的神经系统疾病的方案变得明显,特别是(保罗等人,2010) ...

An Imaging Flow Cytometry Method to Measure Citrullination of H4 Histone as a Read-out for Neutrophil Extracellular Traps Formation
Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract]  

The formation of neutrophil extracellular traps (NETs) is thought to play a critical role in infections and propagating sterile inflammation. Histone citrullination is an essential and early step in NETs formation, detectable prior to the formation of the hallmark extracellular DNA-scaffolded strands. In addition to the classical microscopy method, new technologies are being developed for studies of NETs and their detection, both for research and clinical purposes. Classical microscopy studies of NETs are subjective, low throughput and semi-quantitative, and limited in their ability to capture the early steps. We have developed this novel Imaging Flow Cytometry (IFC) method that specifically identifies and quantifies citrullination of histone H4 as a NETs marker and its relationship with

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[摘要]  [摘要]中性粒细胞胞外陷阱(NETs)的形成被认为在感染和传播无菌炎症中起关键作用。组蛋白瓜氨酸化是NETs形成中必不可少的早期步骤,可在形成标志性的细胞外DNA支架链之前检测到。除了经典的显微镜方法外,还在研究和临床目的开发用于NETs及其检测的新技术。NET的经典显微镜研究具有主观性,低通量和半定量性,并且捕获早期步骤的能力有限。我们开发了这种新颖的成像流式细胞仪 (IFC)方法,专门识别和量化组蛋白H4的瓜氨酸化作为NETs标记及其与核和细胞水平其他改变的关系。这些包括核解聚和超缩合,多分叶状核与1-叶核和细胞膜损伤。在形成特定的细胞外DNA支架链之前,可以在用NETs诱导剂进行不同的治疗期后对NETs标记物进行定量。由于这些高通量基于图像的细胞分析功能可以通过严格的统计来执行,因此该协议适用于实验和临床应用以及作为生物标志物的NETosis的临床评估。

[背景]活化的中性粒细胞迅速募集到感染和受伤的地方;它们有助于宿主抵抗病原体和炎症。大约在二十年前,首次观察到对病原体的反应是,一部分中性粒细胞会经历细胞凋亡或坏死以外的不同类型的细胞死亡。这涉及染色质的早期缩合,核区室和颗粒区室的共定位,最后将这种混合物释放到环境中。锚定核成分(例如组蛋白)或细胞成分的细胞外DNA支架链,其中一些具有很强的抗病原特性,例如弹性蛋白酶或髓过氧化物酶(MPO),被称为“嗜中性细胞外陷阱”或NETs,并具有有效的抗菌活性(Brinkmann等人,2004)。最近的证据表明,母语也非感染性疾病,包括癌症,系统性关联红斑狼疮,镰状细胞病,动脉粥样硬化和血栓形成(Jorch和Kubes,2017年)。尚不清楚NETs或其任何成分(无细胞DNA或组蛋白)是否作为驱动因素导致了这些疾病的病理,或者它们是否是免疫反应失衡的副产物。NETs在某些疾病中也可能充当生物标志物,并提供有关治疗方案功效的信息(Barnado等,2016)。NETs相关成分(例如弹性蛋白酶或MPO)存在于自身免疫性疾病患者的血浆中,也存在于感染中,这使这些分子作为生物标记物的特异性变得复杂。因此,迫切需要用于NETs表征的新方法,这些方法应在研究之间提供一致的标准,并且对于机械和临床应用均可靠。 ...

Derivation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Fibroblasts Using a Non-integrative System in Feeder-free Conditions
Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract]  Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are genetically reprogrammed somatic cells that exhibit features identical to those of embryonic stem cells (ESCs). Multiple approaches are available to derive iPSCs, among which the Sendai virus is the most effective at reprogramming different cell types. Here we describe a rapid, efficient, safe, and reliable approach to reprogram human fibroblasts into iPSCs that are compatible with future iPSCs uses such as genome editing and differentiation to a transplantable cell type. [摘要]  [摘要] 诱导多能干细胞(iPSCs)是一种经过基因重组的体细胞,具有与胚胎干细胞(ESCs)相同的特性。有多种方法可以获得iPSCs,其中仙台病毒是最有效的重编程不同的细胞类型。在这里,我们描述了一种快速、高效、安全、可靠的方法,将人类成纤维细胞重新编程为与将来iPSCs相兼容的iPSCs,如基因组编辑和分化为可移植细胞类型。

[背景] 诱导多能干细胞(iPSCs)是经过基因重组的成体细胞,其形态和功能特性与胚胎干细胞(esc)非常相似(Takahashi和Yamanaka,2006;Yu等人,2007)。它们不仅为疾病建模提供了一个很好的机会,而且为涉及组织退化的病理学的治疗策略的发展提供了一个很好的机会。此外,iPSCs的承诺依赖于一个安全的可补充的细胞源,来源于化学定义的培养基中,并且没有随机的DNA整合。
将体细胞重编程为iPSCs需要强制表达支持多潜能状态的转录因子,包括OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、NANOG和LIN-28(Takahashi和Yamanaka,2006;Takahashi等人,2007;Yu等人,2007)。有多种方法可以将转录因子传递到细胞中,包括那些需要整合到宿主染色体中的方法(Takahashi and ...

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