| Stable Transformation of Arabidopsis thaliana Cell Suspension Cultures: A Case Study for the Overexpression of The COI1 Receptor
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Cell suspension cultures have been studied for decades to produce natural molecules. However, the difficulty in generating stably transformed cell lines has limited their use to produce high value chemicals reproducibly and in elevated quantities.
In this protocol, a method to stably transform and maintain Arabidopsis cell suspension cultures is devised and presented in detail. Arabidopsis cell cultures were directly transformed with A. tumefaciens for the overexpression of the CORONATINE INSENSITIVE 1 (COI1) jasmonate receptor. Cell cultures were established after transformation and continuously maintained and tested for the overexpression of COI1. The protocol was also previously used to silence Arabidopsis peroxidases and allows for long ...
[摘要] [摘要]细胞悬浮培养已经研究了数十年，以生产天然分子。然而，产生稳定转化的细胞系的困难限制了它们用于可再现地和高产量地生产高价值化学品的用途。
在该协议中，设计并详细介绍了稳定转化和维持拟南芥细胞悬浮培养物的方法。直接用根癌农杆菌转化拟南芥细胞培养物，以过量表达可乐宁不敏感1（COI1）茉莉酸酯受体。转化后建立细胞培养物，并连续保持并测试COI1的过表达。该协议以前也曾用于沉默拟南芥过氧化物酶，并允许长期维持转化细胞。提供了在液体和固体培养基中培养维持的详细信息，以及蛋白质表达的证据来证实转化。
所描述的系统为合成生物学研究独立于发育控制的信号传递并获得生物技术和医学领域感兴趣的代谢物提供了强大的工具。
[背景]植物细胞悬浮培养为植物次生代谢产物的生产和去分化组织的研究提供了可行的替代方法（Wu和Ge，2004； Lee等，2010）。数十年来，人们对它们的使用兴趣不断提高，因为它们可以为人类使用的高价值生物技术产品提供连续生产系统。有各种各样的细胞培养物可产生大量具有商业和工业意义的次级代谢产物，例如花青素，甜菜碱，调味剂，甜菊苷等（Rao和Ravishankar，2002）。
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| Candida albicans Culture, Cell Harvesting, and Total RNA Extraction
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] Transcriptional analysis has become a cornerstone of biological research, and with the advent of cheaper and more efficient sequencing technology over the last decade, there exists a need for high-yield and efficient RNA extraction techniques. Fungi such as the human pathogen Candida albicans present a unique obstacle to RNA purification in the form of the tough cell wall made up of many different components such as chitin that are resistant to many common mammalian or bacterial cell lysis methods. Typical in vitro C. albicans cell harvesting methods can be time consuming and expensive if many samples are being processed with multiple opportunities for product loss or sample variation. Harvesting cells via vacuum filtration rather than centrifugation cuts down on time before the cells are ...
[摘要] [摘要]转录分析已成为生物学研究的基石，并且在最近十年中，随着廉价，高效测序技术的出现，对高产量，高效率的RNA提取技术存在着需求。真菌如人病原体白色念珠菌呈现出独特的障碍RNA纯化在坚韧细胞壁的形式作出许多不同的部件，例如几丁质的最多的是对许多常见的哺乳动物细胞或细菌细胞裂解的方法具有抗性。典型的体外白色念珠菌 如果要处理的样品很多，并且产品损失或样品变化的机会很多，则细胞采集方法可能既耗时又昂贵。通过真空过滤而不是离心收集细胞可以减少冷冻前的时间，因此可以改变RNA表达谱的可用时间。对于白色念珠菌而言，真空过滤是优选的，这主要有两个原因：由于暴露的表面积增加，非丸状细胞的细胞裂解速度更快，并且与酵母或细菌细胞不同，丝状细胞首先难以沉淀。与酶法处理相比，使用机械细胞裂解法（通过氧化锆/二氧化硅珠子）可减少加工时间以及总成本。总的来说，该方法是从白念珠菌的体外培养物中提取总RNA的快速，高效且高产率的方法。
[背景]需要快速，可重复的，高效的RNA提取技术已经显著在过去几年里，由于使用RNA测序等表达分析技术的稳步增长成长是变得更加经济实惠，并与测序技术的改进速度更快。各种公司和实验室提供了许多不同的工具包和协议，试图满足这一需求。但是，专门为一种真菌建立的方法可能不适用于另一种真菌，而试剂盒平台由于其应用范围太广，常常会不足。在这里，我们描述了一种细胞培养物，收获，和RNA提取方法为致病性真菌，白色念珠菌，其利用的技术的组合，得到以一致和有效的方式既高产率和高质量的RNA。 ...
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