| Dissecting the Rat Mammary Gland: Isolation, Characterization, and Culture of Purified Mammary Epithelial Cells and Fibroblasts
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] With the advent of CRISPR-Cas and the ability to easily modify the genome of diverse organisms, rat models are being increasingly developed to interrogate the genetic events underlying mammary development and tumorigenesis. Protocols for the isolation and characterization of mammary epithelial cell subpopulations have been thoroughly developed for mouse and human tissues, yet there is an increasing need for rat-specific protocols. To date, there are no standard protocols for isolating rat mammary epithelial subpopulations. Analyzing changes in the rat mammary hierarchy will help us elucidate the molecular events in breast cancer, the cells of origin for breast cancer subtypes, and the impact of the tumor microenvironment. Here we describe several methods developed for 1) rat mammary ...
[摘要] [摘要]随着CRISPR-Cas的出现以及能够轻松修饰各种生物的基因组的能力，越来越多地开发大鼠模型来询问乳腺发育和肿瘤发生的遗传事件。已经为小鼠和人类组织彻底开发了用于分离和表征乳腺上皮细胞亚群的方案，但是对大鼠特异性方案的需求却在不断增长。迄今为止，还没有用于分离大鼠乳腺上皮亚群的标准方案。分析大鼠乳腺层次的变化将有助于我们阐明乳腺癌中的分子事件，乳腺癌亚型的起源细胞以及肿瘤微环境的影响。在这里，我们描述为1）大鼠乳腺上皮细胞分离开发的几种方法；2）大鼠乳腺成纤维细胞分离；3）培养大鼠乳腺上皮细胞；通过4）流式细胞仪分析和鉴定大鼠乳腺细胞；5）免疫荧光。源自该协议的细胞可用于多种目的，包括RNAseq ，药物研究，功能测定，基因/蛋白质表达分析和图像分析。
[背景]大多数与乳腺有关的研究都是在小鼠模型和人体样品中进行的。然而，由于其具有类似于人的药代动力学特征和乳腺发育，该疾病的大鼠模型正变得越来越流行（Russo等人，1990；Jiunn等人，2008； Smalley等人，2016）。像人类腺癌一样，大鼠乳腺癌也经历组织学发展阶段（Russo等，1990； Singh等，2000），并且是卵巢激素依赖性的（Thompson等，1998； ...
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| Advances in Proximity Ligation in situ Hybridization (PLISH)
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] Understanding tissues in the context of development, maintenance and disease requires determining the molecular profiles of individual cells within their native in vivo spatial context. We developed a Proximity Ligation in situ Hybridization technology (PLISH) that enables quantitative measurement of single cell gene expression in intact tissues, which we have now updated. By recording spatial information for every profiled cell, PLISH enables retrospective mapping of distinct cell classes and inference of their in vivo interactions. PLISH has high sensitivity, specificity and signal to noise ratio. It is also rapid, scalable, and does not require expertise in molecular biology so it can be easily adopted by basic and clinical researchers.
[摘要] [摘要]在发育，维持和疾病的背景下了解组织需要确定单个细胞在其天然体内空间范围内的分子谱。我们开发了一种邻近连接原位杂交技术（PLISH），该技术能够定量测量完整组织中单细胞基因的表达，现已更新。通过记录每个分析细胞的空间信息，PLISH可以回顾性绘制不同细胞类别并推断其体内 互动。PLISH具有很高的灵敏度，特异性和信噪比。它也快速，可扩展，并且不需要分子生物学方面的专门知识，因此基础和临床研究人员可以轻松地采用它。
[背景技术]我们最近开发了一种复用原位称为PLISH（邻位连接杂交技术原位杂交）（Nagendran等人，2018）。PLISH与其他现有的空间转录组学技术不同，因为它结合了高性能，快速多路复用，低成本和技术简单性（Wilbrey -Clark等人，2020年）。可以通过自动计算完整的冷冻或石蜡包埋组织中单细胞表达图谱来分析PLISH结果，它与同时进行的免疫染色兼容。
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| Staining and Quantitative Analysis of Myelinating Oligodendrocytes in the Mouse Grey Matter
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Oligodendrocytes generate distinct patterns of myelination throughout the CNS. Variations in myelination along axons may enable neurons to fine-tune conduction velocities and alter signal synchronisation. Here we outline a staining protocol permitting the assessment of the number and length of myelin sheaths formed by oligodendrocyte in the mouse grey matter. This protocol enables the investigation of myelination without the need for reporter mice or technically challenging protocols, aiding the investigation of factors influencing myelin production in the brain.
[摘要] [摘要] 少突胶质细胞在中枢神经系统产生不同的髓鞘形成模式。轴突髓鞘的变化可能使神经元能够微调传导速度和改变信号同步。在这里，我们概述了一个染色方案，允许评估由少突胶质细胞在小鼠灰质中形成的髓鞘的数量和长度。这一方案使研究髓鞘无需报告小鼠或技术上具有挑战性的协议，有助于研究影响大脑髓鞘生成的因素。
[背景] 少突胶质细胞在中枢神经系统（CNS）轴突周围产生绝缘的髓鞘。髓鞘通过鞘间小的无髓鞘间隙处电压依赖性钠通道的浓度加速轴突传导速度——Ranvier节点（Huxley和Stampfli，1949；Rushton，1951；Waxman，1997）。尽管少突胶质细胞遍布中枢神经系统，但并非所有轴突都有髓鞘，这表明髓鞘的形成和大小可能精确地调节动作电位速度和神经元同步性（Pajevic等人，2014）。因此，了解是什么影响少突胶质细胞产生髓鞘的数量（即一个细胞形成的鞘的数量和大小）对于理解髓鞘如何改变神经元功能很重要。
许多技术已经被发展用来分析体内少突胶质细胞的复杂形态。最初，Pio del Rio Hortega的研究使用碳酸银染色法，根据形成的髓鞘的数量和长度来识别和区分少突胶质细胞（Perez ...
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