| Imaging of Human Cancer Cells in 3D Collagen Matrices
|
|
Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Research on cell migration and interactions with the extracellular matrix (ECM) was mostly focused on 2D surfaces in the past. Many recent studies have highlighted differences in migratory behaviour of cells on 2D surfaces compared to complex cell migration modes in 3D environments. When embedded in 3D matrices, cells constantly sense the physicochemical, topological and mechanical properties of the ECM and adjust their behaviour accordingly. Changes in the stiffness of the ECM can have effects on cell morphology, differentiation and behaviour and cells can follow stiffness gradients in a process called durotaxis. Here we introduce a detailed protocol for the assembly of 3D matrices consisting of collagen I/fibronectin and embedding cells for live cell imaging. Further, we will show how ...
[摘要] [摘要]细胞迁移及其与细胞外基质（ECM）相互作用的研究最多过去专注于2D曲面。最近的许多研究都强调了与3D环境中复杂的细胞迁移模式相比，2D表面上的细胞迁移行为的差异。当嵌入3D矩阵中时，细胞会不断感知ECM的物理化学，拓扑和机械特性，并相应地调整其行为。ECM刚度的变化会影响细胞的形态，分化和行为，并且细胞会在称为durotaxis的过程中遵循刚度梯度。在这里，我们介绍了由胶原蛋白I /纤连蛋白和包埋细胞组成的3D矩阵的详细协议，用于活细胞成像。此外，我们将展示如何通过非酶糖基化来增强基质，以及用荧光染料对胶原蛋白进行染色如何使基质和细胞同时成像。该方法可用于在具有不同刚度的3D微环境中对细胞迁移进行成像，定义细胞-基质相互作用以及细胞对变化的ECM的反应，并可视化细胞的基质变形。
[背景]细胞和依赖于动态周围的细胞外基质（ECM）生成的功能性实体的调整两者的，基质和细胞，以预防疾病。多年来，人们一直认为ECM仅为嵌入式细胞提供结构支持。但是，最近的研究突出了ECM的关键功能，而不是其脚手架功能。ECM的修饰已与疾病进展相关，尤其是在癌症的背景下，与转移的发生有关，以及与临床预后和患者生存的相关性。
...
|
|
|
| Magnet-assisted Flow Cytometry of in vivo Tumors to Quantitate Cell-specific Responses to Magnetic Iron Oxide Nanoparticles
|
|
Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] A clear understanding of nanoparticle interactions with living systems at the cellular level is necessary for developing nanoparticle-based therapeutics. Magnetic iron oxide nanoparticles provide unique opportunities to study these interactions because of their responsiveness to magnetic fields. This enables sorting of cells containing nanoparticles from in vivo models. Once sorted, flow cytometry can identify individual cell types, which can be further analyzed for iron content, gene or protein expression changes associated with nanoparticle uptake, and for other biological responses at a molecular level. Here we provide a detailed protocol to sort and identify cells in the tumor microenvironment that have internalized magnetic iron oxide nanoparticles following intravenous ...
[摘要] [摘要] 在开发基于纳米颗粒的治疗方法时，必须对纳米颗粒与生物系统在细胞水平上的相互作用有一个清晰的了解。磁性氧化铁纳米颗粒因其对磁场的响应性而提供了研究这些相互作用的独特机会。这使得能够从体内模型中筛选出包含纳米颗粒的细胞。排序后，流式细胞仪可以识别单个细胞类型，然后可以进一步分析其铁含量，与纳米颗粒摄取相关的基因或蛋白质表达变化以及分子水平的其他生物学反应。在这里，我们提供了详细的协议，用于在静脉内给药后分类和鉴定肿瘤微环境中具有内在磁性氧化铁纳米颗粒的细胞。
[背景]几种基于纳米颗粒的抗癌药物已在临床上使用，因为它们已显示出对诊断，抗癌药物传递和热疗的安全性和有效性（Marchal等，2015 ；Wu等，2015）。然而，在我们对癌症纳米医学的理解上仍然存在重大差距，主要是因为纳米颗粒与免疫细胞之间相互作用的细节仍然未知。其他人和我们已经将纳米粒子免疫细胞的相互作用确定为影响体内纳米粒子命运和在肿瘤中保留的关键变量（Sheen等人，2014；Zanganeh等人，2016； ...
|
|
|