| Improved Macrophage Isolation from Mouse Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Macrophages are a heterogeneous class of innate immune cells that offer a primary line of defense to the body by phagocytizing pathogens, digesting them, and presenting the antigens to T and B cells to initiate adaptive immunity. Through specialized pro-inflammatory or anti-inflammatory activities, macrophages also directly contribute to the clearance of infections and the repair of tissue injury. Macrophages are distributed throughout the body and largely carry out tissue-specific functions. In skeletal muscle, macrophages regulate tissue repair and regeneration; however, the characteristics of these macrophages are not yet fully understood, and their involvement in skeletal muscle aging remains to be elucidated. To investigate these functions, it is critical to be able to efficiently ...
[摘要] [摘要]巨噬细胞是异质类，提供防御的在主体上的主线路先天免疫细胞的通过phagocyt定义的病原体，消化荷兰国际集团它们，本荷兰国际集团的抗原的T和B细胞以引发适应性免疫。通过专门的促炎或抗炎活动，巨噬细胞也直接有助于清除感染和修复组织损伤。巨噬细胞分布在全身，并主要执行组织特定功能。在骨骼肌中，巨噬细胞调节组织的修复和再生。H 然而，这些巨噬细胞的特征还没有被完全理解，它们在骨骼肌衰老中的作用还有待阐明。为了研究这些功能，至关重要的是能够有效地从骨骼肌中分离出足够的纯度和产量的巨噬细胞用于各种下游分析。在这里，我们详细描述了一种从小鼠中分离骨骼肌巨噬细胞的优化方法。这种方法已允许的isolat的离子的高纯度CD45 + / CD11b的+从年轻和年老小鼠，其可以进一步用于流巨噬细胞cytometr ÿ分析，荧光激活细胞分选（FACS），和单细胞RNA测序。
[背景] Metchnikoff及其同事在一个多世纪以前发现巨噬细胞为“专业”吞噬细胞（Underhill等，2016）。后来的研究表明，巨噬细胞构成一类异质的细胞，在整个人体的组织中发挥着不同的功能（Wynn等人，2013）。巨噬细胞可分为两种主要类型：组织驻留巨噬细胞和非组织驻留巨噬细胞（Ginhoux和Guilliams ...
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| Multiplex T-cell Stimulation Assay Utilizing a T-cell Activation Reporter-based Detection System
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Immune tolerance and response are both largely driven by the interactions between the major histocompatibility complex (MHC) expressed by antigen presenting cells (APCs), T-cell receptors (TCRs) on T-cells, and their cognate antigens. Disordered interactions cause the pathogenesis of autoimmune diseases such as type 1 diabetes. Therefore, the identification of antigenic epitopes of autoreactive T-cells leads to important advances in therapeutics and biomarkers. Next-generation sequencing methods allow for the rapid identification of thousands of TCR clonotypes from single T-cells, and thus there is a need to determine cognate antigens for identified TCRs. This protocol describes a reporter system of T-cell activation where the fluorescent reporter protein ZsGreen-1 is driven by nuclear ...
[摘要] [摘要] 免疫耐受和应答都很大程度上由抗原呈递细胞（APC）表达的主要组织相容性复合物（MHC），T细胞上的T细胞受体（TCR）及其同源抗原之间的相互作用驱动。相互作用障碍导致自身免疫性疾病（例如1型糖尿病）的发病机理。因此，鉴定自身反应性T细胞的抗原表位导致治疗和生物标志物的重要进展。下一代测序方法可从单个T细胞快速鉴定数千种TCR克隆型，因此需要确定已鉴定TCR的同源抗原。该协议描述了T细胞活化的报告系统，其中荧光报告蛋白ZsGreen-1由活化T细胞的核因子（NFAT）信号驱动并通过流式细胞仪读取。记者T细胞也组成性表达额外的一对荧光素tein作为识别物，允许同时多路复用多达8种不同的报告T细胞系，每种表达不同的目标TCR，可通过流式细胞仪区分。一旦制成TCR表达细胞系，仅需一个转导步骤即可将其无限期用于制备新的T细胞系。这种多路复用系统允许筛选TCR-抗原相互作用的数量，否则这些相互作用将是不切实际的，可在多种情况下使用（即，筛选单个抗原或抗原库），并可用于研究任何T细胞-MHC-抗原三分子相互作用。
[背景] T细胞，抗原呈递细胞（APC）及其同源抗原之间的相互作用是自身免疫性疾病（例如1型糖尿病）的主要事件（Michels等，2017； ...
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| Isolation of Extracellular Vesicles Derived from Mesenchymal Stromal Cells by Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) are a heterogeneous group of membranous vesicles that differ on their biogenesis and release pathways, such as exosomes, microvesicles and apoptotic bodies. They are involved in cell-to-cell communication delivering signal molecules (proteins, nucleic acids, lipids, etc.) that can regulate different physiological processes, as well as the development and progression of several diseases. There are different methods and commercial kits to isolate EVs and depending on the methodology one could obtain EVs with different degrees of efficiency, purity and it can be more or less time-consuming. Then, the choice has to be according to the different advantages and disadvantages, and their use for downstream applications. Here, we describe the EVs isolation ...
[摘要] [摘要]细胞外囊泡（EV多个），关于它们的生物合成和释放途径不同膜囊泡的一组异质小号，诸如外来体，微泡和凋亡小体。它们参与细胞间传递信号的信号分子（蛋白质，核酸，脂质等），这些信号分子可调节不同的生理过程以及几种疾病的发生和发展。分离电动汽车有不同的方法和商业工具包，根据方法学的不同，人们可以获得具有不同程度的效率，纯度的电动汽车，这或多或少会耗时。然后，必须根据不同的优缺点及其在下游应用中的用途进行选择。在这里，我们描述了通过超速离心从间充质基质细胞分离电动汽车的方法。可以使用通用培养基和缓冲液进行电动汽车隔离，并且仅需要分析型超速离心机即可。此外，该方法可用于获得电动车的大量再现性良好发展体外和体内实验，研究它们的生物学作用小号。
[背景]间充质干细胞（MSCs）对不同疾病的进展具有保护作用，有助于免疫调节和炎症状态（Bartholomew等，2002； Togel等，2005； Azmi等，2013； Ebrahimi等人，2013； Ben-Ami等人，2014）。它们的保护作用不仅归因于它们的转分化作用，还归因于它们的旁分泌机制，例如释放出具有免疫调节，抗炎，抗凋亡和促血管生成功能的细胞外小泡（EV）（Bruno等，2009； Camussi等）。 。，2010一个;农庄。等人，2020） ...
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