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Date:
2020-12-05
[Abstract] Ribosomes are an integral part of cellular life. They are complex molecular machines consisting of multiple ribosomal proteins and RNAs. To study different aspects of ribosome composition, many methods have been developed over the decades. Here, we describe how to purify ribosomes from the α-proteobacterium Rhodopseudomonas palustris. Following this protocol, RNA can be extracted from either purified ribosomes or directly from cell cultures, and ribosomal RNAs quantified using Northern blot. This protocol gives an example of studying ribosomes in a bacterium other than the commonly used E. coli. The challenge of performing Northern blots with rRNA is also addressed in detail.
[摘要] [摘要]核糖体是细胞生命的组成部分。它们是由多种核糖体蛋白和RNA组成的复杂分子机器。为了研究核糖体组成的不同方面，几十年来已经开发了许多方法。在这里，我们描述如何从α-变形杆菌Rhodopseudomonas palustris中纯化核糖体。按照该协议，可以从纯化的核糖体中提取RNA，也可以直接从细胞培养物中提取RNA，并使用Northern印迹对核糖体RNA进行定量。该协议给出了研究除常用大肠杆菌外的细菌中核糖体的一个例子。还详细介绍了使用rRNA进行Northern杂交的挑战。
[背景]细菌细胞的命运是紧密相连的核糖体。我们最近的研究表明，活性核糖体在营养缺乏的palustris细胞的存活机制中起着重要作用（Yin等人，2019）。核糖体通过一系列超速离心纯化，并采用经典方法优化的方法（Lawrence等，2016）。使用不太常用的毛细管转移系统，通过RNA印迹检测核糖体RNA群体。纯化步骤的细节可能极大地影响核糖体的状态。这些方法在这里进行了详细描述，对于研究多种细菌中的翻译设备的研究人员应该具有广泛的兴趣。
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