| Detection and Quantification of African Swine Fever Virus in MA-104 Cells
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Detection of live African swine fever virus (ASFV) has historically relied on the use of primary swine macrophages (PSM). PSM do not replicate and have to be isolated fresh from donor swine. We previously identified that a MA-104 cells (ATCC #CRL-2378.1), a commercially available cell line isolated from African green monkey (Cercopithecus aethiops) kidney epithelial cells, supports the detection of ASFV from field samples with a sensitivity comparable to that of primary swine macrophages. Collection of swine blood or lungs is time costing, which is often not readily available in most veterinary diagnostic laboratories. MA-104 cells could thus be used as substitute for primary swine macrophages to save significant lead time by avoiding the production of primary swine macrophages. ...
[摘要] [摘要]活的非洲猪瘟病毒（ASFV）的检测在历史上一直依赖于原代猪巨噬细胞（PSM）的使用。PSM不能复制，必须从供体猪中新鲜分离。我们先前发现，MA-104细胞（ATCC＃CRL-2378.1）是一种从非洲绿猴（Cercopithecus aethiops ）肾上皮细胞分离的商业细胞系，支持从野外样品中检测ASFV，其灵敏度可与ASFV媲美。原发性猪巨噬细胞。Ç的猪的血液或肺ollection是时间成本计算，这往往是在大多数兽医诊断实验室容易获得的。MA-104细胞因此可以用作原代猪巨噬细胞的替代品，通过避免原代猪巨噬细胞的产生来节省大量的准备时间。
[背景]非洲猪瘟病毒（ASFV）的成员，非洲猪瘟病毒科的家庭，导致野猪和家猪具有高度传染性和致命性出血热，即非洲猪瘟（ASF）。成熟的病毒颗粒（病毒粒子）直径为175-215 nm，脂质双层包裹了二十面体衣壳和180-190千碱基对的双链DNA基因组。根据宿主特征和病毒株，该病毒会引起多种症状，包括高度致死性至亚临床性（Tulman等，2009 ...
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| Generation and Implementation of Reporter BHK-21 Cells for Live Imaging of Flavivirus Infection
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] The genus Flavivirus within the family Flaviviridae includes many viral species of medical importance, such as yellow fever virus (YFV), Zika virus (ZIKV), and dengue virus (DENV), among others. Presently, the identification of flavivirus-infected cells is based on either the immunolabeling of viral proteins, the application of recombinant reporter replicons and viral genomes, or the use of cell-based molecular reporters of the flaviviral protease NS2B-NS3 activity. Among the latter, our flavivirus-activatable GFP and mNeptune reporters contain a quenching peptide (QP) joined to the fluorescent protein by a linker consisting of a cleavage site for the flavivirus NS2B-NS3 proteases (AAQRRGRIG). When the viral protease cleaves the linker, the quenching peptide is removed, and the ...
[摘要] [摘要]本属黄病毒家族中的黄病毒包括医学重要性许多病毒种类，如黄热病病毒（YFV），寨卡病毒（ZIKV）和登革热病毒（DENV），等等。目前，黄病毒感染细胞的鉴定是基于病毒蛋白的免疫标记，重组报告子复制子和病毒基因组的应用，或黄病毒蛋白酶NS2B-NS3活性的基于细胞的分子报告子的使用。在后者中，我们的黄病毒可激活的GFP和mNeptune报道分子含有通过接头连接到荧光蛋白的淬灭肽（QP），该接头由黄病毒NS2B - NS3蛋白酶（AAQRRGRIG）的切割位点组成。当病毒蛋白酶切割接头时，淬灭肽被去除，并且荧光蛋白采用促进荧光的构象。在这里，我们提供了用于表达，选择和实施表达黄病毒基因编码分子报告子的稳定BHK-21细胞的详细协议，适用于通过活细胞成像监测病毒感染。我们还将描述图像分析过程并提供所需的软件管道。我们的报告细胞允许通过活细胞成像对黄病毒的参考菌株和天然菌株实施单细胞感染动力学以及噬菌斑测定。
图形摘要：
黄病毒感染实时成像的报告基因BHK-21细胞的产生与实施工作流。
[背景]黄病毒代表了正在引起并正在重新出现的全球性威胁，可能引起动物和人类疾病，包括许多与医学有关的病毒，例如黄热病病毒（YFV），西尼罗河病毒（WNV），日本脑炎病毒（JEV），登革热病毒（DENV），并兹卡六RUS（ZIKV），等等（摹·乌尔德·所罗门，2008） ...
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| Bioorthogonal Labeling and Chemoselective Functionalization of Lung Extracellular Matrix
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Decellularized extracellular matrix (ECM) biomaterials derived from native tissues and organs are widely used for tissue engineering and wound repair. To boost their regenerative potential, ECM biomaterials can be functionalized via the immobilization of bioactive molecules. To enable ECM functionalization in a chemoselective manner, we have recently reported an effective approach for labeling native organ ECM with the click chemistry-reactive azide ligand via physiologic post-translational glycosylation. Here, using the rat lung as a model, we provide a detailed protocol for in vivo and ex vivo metabolic azide labeling of the native organ ECM using N-Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated (Ac4GalNAz), together with procedures for decellularization and labeling characterization. Our ...
[摘要] [摘要]源自天然组织和器官的脱细胞细胞外基质（ECM）生物材料被广泛用于组织工程和伤口修复。为了增强其再生潜力，可以通过固定生物活性分子来使ECM生物材料功能化。为了使ECM以化学选择性的方式实现功能化，我们最近报告了一种有效的方法，可通过生理学上的翻译后糖基化，用点击化学反应的叠氮化物配体标记天然器官ECM 。在此，使用大鼠肺为模型，我们提供一种用于详细方案在体内和离体代谢叠氮化物使用N- Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated天然器官ECM的标记（AC 4GalNAz），以及用于脱细胞和标记表征的程序。我们的方法可以在体内三天内或离体器官培养期间的一天之内进行特异性而稳定的ECM标记。脱细胞后，所得的ECM标记保持稳定。通过我们的方法，ECM生物材料可以用所需的炔烃修饰的生物分子（例如生长因子和糖胺聚糖）进行功能化，以用于组织工程和再生应用。
关键字：细胞外基质，脱细胞，生物正交，化学选择性功能化，点击化学，肺
[背景]细胞外基质（ECM）是由特定组织或器官的非细胞成分组成的水合网络支架，在通过其所包含的生物活性成分（例如纤维蛋白，生长）支持住宅细胞的活动中起关键作用。因子和糖胺聚糖（GAG）（Theocharis et ...
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