| Dissecting the Rat Mammary Gland: Isolation, Characterization, and Culture of Purified Mammary Epithelial Cells and Fibroblasts
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] With the advent of CRISPR-Cas and the ability to easily modify the genome of diverse organisms, rat models are being increasingly developed to interrogate the genetic events underlying mammary development and tumorigenesis. Protocols for the isolation and characterization of mammary epithelial cell subpopulations have been thoroughly developed for mouse and human tissues, yet there is an increasing need for rat-specific protocols. To date, there are no standard protocols for isolating rat mammary epithelial subpopulations. Analyzing changes in the rat mammary hierarchy will help us elucidate the molecular events in breast cancer, the cells of origin for breast cancer subtypes, and the impact of the tumor microenvironment. Here we describe several methods developed for 1) rat mammary ...
[摘要] [摘要]随着CRISPR-Cas的出现以及能够轻松修饰各种生物的基因组的能力，越来越多地开发大鼠模型来询问乳腺发育和肿瘤发生的遗传事件。已经为小鼠和人类组织彻底开发了用于分离和表征乳腺上皮细胞亚群的方案，但是对大鼠特异性方案的需求却在不断增长。迄今为止，还没有用于分离大鼠乳腺上皮亚群的标准方案。分析大鼠乳腺层次的变化将有助于我们阐明乳腺癌中的分子事件，乳腺癌亚型的起源细胞以及肿瘤微环境的影响。在这里，我们描述为1）大鼠乳腺上皮细胞分离开发的几种方法；2）大鼠乳腺成纤维细胞分离；3）培养大鼠乳腺上皮细胞；通过4）流式细胞仪分析和鉴定大鼠乳腺细胞；5）免疫荧光。源自该协议的细胞可用于多种目的，包括RNAseq ，药物研究，功能测定，基因/蛋白质表达分析和图像分析。
[背景]大多数与乳腺有关的研究都是在小鼠模型和人体样品中进行的。然而，由于其具有类似于人的药代动力学特征和乳腺发育，该疾病的大鼠模型正变得越来越流行（Russo等人，1990；Jiunn等人，2008； Smalley等人，2016）。像人类腺癌一样，大鼠乳腺癌也经历组织学发展阶段（Russo等，1990； Singh等，2000），并且是卵巢激素依赖性的（Thompson等，1998； ...
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| Derivation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Fibroblasts Using a Non-integrative System in Feeder-free Conditions
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are genetically reprogrammed somatic cells that exhibit features identical to those of embryonic stem cells (ESCs). Multiple approaches are available to derive iPSCs, among which the Sendai virus is the most effective at reprogramming different cell types. Here we describe a rapid, efficient, safe, and reliable approach to reprogram human fibroblasts into iPSCs that are compatible with future iPSCs uses such as genome editing and differentiation to a transplantable cell type.
[摘要] [摘要] 诱导多能干细胞（iPSCs）是一种经过基因重组的体细胞，具有与胚胎干细胞（ESCs）相同的特性。有多种方法可以获得iPSCs，其中仙台病毒是最有效的重编程不同的细胞类型。在这里，我们描述了一种快速、高效、安全、可靠的方法，将人类成纤维细胞重新编程为与将来iPSCs相兼容的iPSCs，如基因组编辑和分化为可移植细胞类型。
[背景] 诱导多能干细胞（iPSCs）是经过基因重组的成体细胞，其形态和功能特性与胚胎干细胞（esc）非常相似（Takahashi和Yamanaka，2006；Yu等人，2007）。它们不仅为疾病建模提供了一个很好的机会，而且为涉及组织退化的病理学的治疗策略的发展提供了一个很好的机会。此外，iPSCs的承诺依赖于一个安全的可补充的细胞源，来源于化学定义的培养基中，并且没有随机的DNA整合。
将体细胞重编程为iPSCs需要强制表达支持多潜能状态的转录因子，包括OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、NANOG和LIN-28（Takahashi和Yamanaka，2006；Takahashi等人，2007；Yu等人，2007）。有多种方法可以将转录因子传递到细胞中，包括那些需要整合到宿主染色体中的方法（Takahashi and ...
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