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Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Oocyte maturation is a process wherein an oocyte arrested at prophase of meiosis I resumes meiosis to become a fertilizable egg. In starfish ovaries, a hormone released from follicle cells activates the oocytes, resulting in an increase in their intracellular pH (pHi), which is required for spindle assembly. Herein, we describe a protocol for pHi measurement in living oocytes microinjected with the pH-sensitive dye BCECF. For in vivo BCECF calibration, we treated oocytes with artificial seawater containing CH3COONH4 to clamp pHi, injected pH-standard solutions, and converted the BCECF fluorescence intensity ratios to pHi values. Of note, if the actual pHi is higher or lower than the known pH of injected ...
[摘要] [摘要]卵母细胞成熟是在减数分裂I前期停滞的卵母细胞恢复减数分裂成为可受精卵的过程。在海星卵巢中，从卵泡细胞释放的激素激活卵母细胞，导致其胞内pH（pH i ）升高，这是纺锤体组装所必需的。在本文中，我们描述了在用pH敏感染料BCECF显微注射的活卵母细胞中测量pH i的方案。对于在体内BCECF校准，我们用含有CH人造海水的卵母细胞3 COONH 4到夹具的pH我 ，注入pH标准溶液，并将BCECF荧光强度比值转换为pH i值。值得注意的是，如果实际pH值我比注入标准溶液的pH值已知更高或更低时，BCECF的荧光强度比将分别减小或增大。另一方面，注入溶液的pH值没有显示出荧光强度的变化，应该认为是实际pH值i 。这些用于pH i校准和钳制的方法简单且可重现。
关键词：细胞内pH，BCECF ，卵母细胞，显微注射，海星，标定
[背景]细胞内pH （pH为我）测量为细胞生物学的研究中是非常有用的方法，因为pH值我起着在多种细胞过程中起重要作用，如配子活化（约翰逊和EPEL ，1976; Shen和斯坦哈特，1978 ;蒂尔尼等，1978 ），细胞分裂（Schuldiner和Rozengurt ，1982; Moolenaar译者等，1983;阿南德和普拉萨德，1989; ...
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