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Date:
2020-11-20
[Abstract] With the advent of CRISPR-Cas and the ability to easily modify the genome of diverse organisms, rat models are being increasingly developed to interrogate the genetic events underlying mammary development and tumorigenesis. Protocols for the isolation and characterization of mammary epithelial cell subpopulations have been thoroughly developed for mouse and human tissues, yet there is an increasing need for rat-specific protocols. To date, there are no standard protocols for isolating rat mammary epithelial subpopulations. Analyzing changes in the rat mammary hierarchy will help us elucidate the molecular events in breast cancer, the cells of origin for breast cancer subtypes, and the impact of the tumor microenvironment. Here we describe several methods developed for 1) rat mammary ...
[摘要] [摘要]随着CRISPR-Cas的出现以及能够轻松修饰各种生物的基因组的能力，越来越多地开发大鼠模型来询问乳腺发育和肿瘤发生的遗传事件。已经为小鼠和人类组织彻底开发了用于分离和表征乳腺上皮细胞亚群的方案，但是对大鼠特异性方案的需求却在不断增长。迄今为止，还没有用于分离大鼠乳腺上皮亚群的标准方案。分析大鼠乳腺层次的变化将有助于我们阐明乳腺癌中的分子事件，乳腺癌亚型的起源细胞以及肿瘤微环境的影响。在这里，我们描述为1）大鼠乳腺上皮细胞分离开发的几种方法；2）大鼠乳腺成纤维细胞分离；3）培养大鼠乳腺上皮细胞；通过4）流式细胞仪分析和鉴定大鼠乳腺细胞；5）免疫荧光。源自该协议的细胞可用于多种目的，包括RNAseq ，药物研究，功能测定，基因/蛋白质表达分析和图像分析。
[背景]大多数与乳腺有关的研究都是在小鼠模型和人体样品中进行的。然而，由于其具有类似于人的药代动力学特征和乳腺发育，该疾病的大鼠模型正变得越来越流行（Russo等人，1990；Jiunn等人，2008； Smalley等人，2016）。像人类腺癌一样，大鼠乳腺癌也经历组织学发展阶段（Russo等，1990； Singh等，2000），并且是卵巢激素依赖性的（Thompson等，1998； ...
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