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15 ml STEMFULLTM low cell adhesion tube

Company: Sumitomo Bakelite Co.
Catalog#: MS-90150Z
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Fluidigm Based Single-cell Gene Expression Library Preparation from Patient-derived Small Intestinal Organoids
Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract]  In this protocol, we describe our methods to isolate crypts from patients' biopsy samples and to culture human intestinal stem cells as it’s called “organoid.” Beyond that, we describe how to dissociate organoids cells into single cells for single-cell analysis as a further application. This protocol should provide investigators sufficient tools to generate human organoids from biopsy samples and to accomplish a stable in-vitro assay system. [摘要]  [摘要]在此协议中,我们描述了从患者的活检样本中分离隐窝并培养人类肠干细胞(称为“类器官”)的方法。除此之外,我们还介绍了如何将类器官细胞分解为单细胞以进行单细胞分析,作为进一步的应用。该方案应为研究人员提供足够的工具,以从活检样品中产生人类器官并完成稳定的体外测定系统。

[背景]肠上皮是一个多功能组织即编排动态平衡并形成物理屏障。由肠干细胞(ISC)产生的每个肠上皮细胞(IEC)每4-5天更新一次该上皮(Crosnier等,2006 )。ISC位于隐窝的底部,并表达各种文献先前报道的特定标记(Muñoz等,2012 ;Clevers ,2013 )。研究表明,干细胞正确更新的功能障碍与肠道疾病有关,对ISCs动态的了解可能阐明了包括炎症性肠病(IBD)在内的各种疾病的发病机制(Okamoto et al。,2016 )。

然而,由于缺乏能概括生理性肠上皮层的有效模型,因此对肠干细胞特性的研究具有挑战性。史诗般的“类器官”的引入克服了种种障碍(Sato等人,2009和2011 ),可以从单个ISC体外建立类器官,并忠实地保留其起源组织的生理和病理特征(Middendorp等人)。 。,2014 )。类器官已被用于各种胃肠道疾病解剖基础病理变化(Fatehullah 。等人,2016; Noben等人,2017 ...

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