| Optimized Immunostaining of Embryonic and Early Postnatal Mouse Brain Sections
|
|
Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The mammalian neocortex, the outer layer of the cerebrum and most recently evolved brain region, is characterized by its unique areal and laminar organization. Distinct cortical layers and areas can be identified by the protein expression of graded transcription factors and molecular determinants that define the identity of different projection neurons. Thus, specific detection and visualization of protein expression is crucial for assessing the identity of neocortical neurons and, more broadly, for understanding early and late developmental mechanisms and function of this complex system. Several immunostaining/immunofluorescence methods exist to detect protein expression. Published protocols vary with regard to subtle details, which may impact the final outcome of the immunofluorescence. ...
[摘要] [摘要]哺乳动物的新皮层是大脑的外层，也是最近进化的大脑区域，其特征在于其独特的区域和层状组织。不同的皮质层和区域可以通过分级转录因子的蛋白质表达和定义不同投射神经元身份的分子决定簇来鉴定。因此，蛋白质表达的特异性检测和可视化对于评估新皮层神经元的身份至关重要，更广泛地来说，对于理解这个复杂系统的早期和晚期发育机制和功能至关重要。一些 存在免疫染色/免疫荧光方法来检测蛋白质表达。已发布的方案在细节方面有所不同，可能会影响免疫荧光的最终结果。在这里，我们提供了详细的协议，适用于低温恒温器薄切片和厚振动切片器薄切片，该协议已成功地开发了针对新皮质发育关键分子的抗体。从早期的技术措施测距的大脑采集到的图像分析和统计，我们包括有关样品包容和每一个细节部分ING，幻灯片存储和旨在减少非特异性背景最佳抗体稀释。在实验室中常规使用的，我们的背景优化的免疫染色协议允许区域的有效检测-和层-独特新皮层投射神经元的特定的分子决定因素。
图形摘要：
优化的小鼠脑切片免疫染色方案的工作流程图。一。一个流程图的不同步骤的优化免疫染色协议薄低温恒温器和厚振动切片。乙。例如，用于在薄冠状免疫染色对SATB2和CTIP2部（20 μ ...
|
|
|
| Preparing Viable Hippocampal Slices from Adult Mice for the Study of Sharp Wave-ripples
|
|
Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] We describe a protocol for preparing acute brain slices which can produce robust hippocampal sharp wave-ripples (SWRs) in vitro. The protocol is optimized for its simplicity and reliability for the preparation of solutions, slicing, and recovery incubation. Most slices in almost every mouse prepared though the protocol expressed vigorous spontaneous SWRs for ~24 h, compared to the 20-30% viability from "standard" low sodium slicing protocols. SWRs are spontaneous neuronal activity in the hippocampus and are essential for consolidation of episodic memory. Brain slices reliably expressing SWRs are useful for studying memory impairment and brain degeneration diseases in ex vivo experiments. Spontaneous expression of SWRs is sensitive to conditions of slicing and ...
[摘要] [摘要]我们描述了一种制备急性脑切片的方案，该方案可在体外产生强大的海马锐波波纹（SWR）。该协议经过优化，其简单性和可靠性可用于制备溶液，切片和恢复孵育。通过该协议，几乎每只小鼠中的大多数切片都表现出强烈的自发性SWR，持续约24小时，而“标准”低钠切片协议的生存力为20-30％。SWR是海马的自发性神经元活动，对于巩固发作性记忆至关重要。可靠表达SWR的脑片可用于研究离体的记忆障碍和脑退化疾病实验。SWR的自发表达对记录期间的切片和灌注/充氧条件敏感。SWR的振幅和丰度通常用作可行切片的生物标记。关键改进包括快速循环，切片后较长的恢复时间（3-6小时）以及使组织在32岁时恢复°C在充分灌注的培养箱中。我们定制设备中的切片可以表达自发SWR数小时，这表明在本地网络中具有平衡的激发和抑制作用的时间很长。年龄较大的小鼠（约产后180天）的切片显示出与年龄较小的小鼠（产后21-30）相似的生存力。
[背景]急性脑切片已成为电生理学和其他神经科学研究的重要准备。尽管有大量文献描述了脑切片的用法，但通常不那么详细地讨论可靠地生产可行切片的方案。来自年长动物的切片通常不太可行。通常使用健康的细胞形态和神经元的电生理特性来描述脑切片的活力。但是，组织中看起来健康的神经元并不总是转化为正常的网络行为。例如，用标准蔗糖替代方案制备的薄片（例如，Aghajanian和Rasmussen ...
|
|
|