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Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Cryo-Electron Tomography (cryo-ET) is a method that enables resolving the structure of macromolecular complexes directly in the cellular environment. However, sample preparation for in situ Cryo-ET is labour-intensive and can require both cryo-lamella preparation through cryo-Focused Ion Beam (FIB) milling and correlative light microscopy to ensure that the event of interest is present in the lamella. Here, we present an integrated cryo-FIB and light microscope setup called the Photon Ion Electron microscope (PIE-scope) that enables direct and rapid isolation of cellular regions containing protein complexes of interest. The PIE-scope can be retrofitted on existing microscopes, although the drawings we provide are meant to work on ThermoFisher DualBeams with ...
[摘要] [摘要] 低温电子断层扫描（cryo-ET）是一种能够直接在细胞环境中解析大分子复合物结构的方法。但是，原位Cryo-ET的样品制备需要大量人工，并且可能需要通过低温聚焦离子束（FIB）研磨和相关光学显微镜来制备低温薄片，以确保感兴趣的事件存在于薄片中。在这里，我们介绍了一个集成的低温FIB和光学显微镜设置，称为E 上的P hoton I 电子显微镜（PIE-scope），可以直接和快速分离包含目标蛋白质复合物的细胞区域。尽管我们提供的图纸旨在在ThermoFisher DualBeams上进行细微的机械改造，但可以在其他品牌上使用，但PIE显微镜可以在现有显微镜上进行改装。
[背景 ] 低温电子断层扫描（低温ET）是目前用于直接在其天然环境中研究的蛋白和蛋白复合物的结构的主要方法（Beck和鲍迈斯特，2016） 。细胞通常太厚而无法使用cryo-ET成像，因此，要克服细胞厚度的问题，最常见且成功的方法是使用低温聚焦离子束显微镜（FIB）来稀释样品并产生平面电子。大约300纳米厚的透明薄片（Marko 等，2006和2007）。重要的是要注意细胞具有极为拥挤和复杂的环境; ...
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