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Date:
2020-09-20
[Abstract] B lymphocyte activation is regulated by its membrane-bound B cell receptors (BCRs) upon recognizing diverse antigens. It is hypothesized that antigen binding would trigger conformational changes within BCRs, followed by a series of downstream signaling activation. To measure the BCR conformational changes in live cells, a fluorescent site-specific labeling technique is preferred. Genetically encoded fluorescent tags visualize the location of the target proteins. However, these fluorescent proteins are large (~30 kDa) and would potentially perturb the conformation of BCRs. Here, we describe the general procedures of utilizing short tag-based site-specific labeling methodologies combining with fluorescence resonance energy transfer (FRET) assay to monitor the conformational changes within ...
[摘要] [摘要 ] 识别各种抗原后，B淋巴细胞的活化受其膜结合B细胞受体（BCR）的调节。假设抗原结合将触发BCR内的构象变化，随后引发一系列下游信号激活。为了测量活细胞中的BCR构象变化，首选荧光位点特异性标记技术。遗传编码的荧光标签可视化目标蛋白的位置。但是，这些荧光蛋白很大（〜30 k Da ），可能会干扰BCR的构象。在这里，我们描述了利用基于短标签的位点特异性标记方法与荧光共振能量转移（FRET）分析相结合来监视BCR细胞外域内抗原结合时构象变化的一般程序。
[背景 ] B淋巴细胞是负责产生针对病理从识别由细胞膜抗原所产生的保护性抗体的表达的B细胞受体（BCRS）。BCR复合物包含膜结合免疫球蛋白（mIg ）和Igα和Igβ的非共价连接的异二聚体。所述mIg的由两个替代轻链和两个免疫球蛋白重链。所述mIg的重链含有胞外结构域，跨膜结构域，和细胞内结构域。在胞外mIg 的N-末端结构域，有两个可变的抗原结合基序，其后是恒定结构域（Reth，1992）。就IgM-BCR的重链而言，它包含4个域，即Cμ1，Cμ2，Cμ3和Cμ4（图1）。重链和轻链多肽中的结构可变域形成了抗体特有的抗原结合位点。例如，VRC01广泛中和抗体（bnAbs ...
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