| Production and Bioassay of a Diffusible Factor that Induces Gametophyte-to-Sporophyte Developmental Reprogramming in the Brown Alga Ectocarpus
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] The brown alga Ectocarpus has a haploid-diploid life cycle that involves alternation between two multicellular generations, the sporophyte and the gametophyte. Life cycle generation is not determined by ploidy but by a genetic system that includes two different three amino acid loop extension homeodomain transcription factors called OUROBOROS and SAMSARA. In addition, sporophytes have been shown to secrete a diffusible factor into the medium that can induce gametophyte initial cells to switch from the gametophyte to the sporophyte developmental program. The protocol presented here describes how to produce sporophyte-conditioned medium containing the diffusible sporophyte-inducing factor and how to assay for activity of the factor using a meio-spore-based bioassay. The protocol, ...
[摘要] [摘要 ] 褐藻赤藓皮果的单倍体-二倍体生命周期涉及孢子体和配子体两个多细胞世代之间的交替。生命周期的产生不是由倍性决定的，而是由一个遗传系统决定的，该遗传系统包括两个不同的三个氨基酸环延伸同源域转录因子，称为OUROBOROS和SAMSARA。另外，已经显示孢子体将可扩散因子分泌到培养基中，该因子可诱导配子体初始细胞从配子体转换为孢子体发育程序。该协议呈现这里描述了如何以产生含有扩散孢子体诱导因子孢子体条件培养基，以及如何测定用于使用该因子的活性杜梅尤-spore基于生物测定。该协议描述了如何优化这些程序的几个步骤，将为将来的工作提供有用的工具，旨在表征可扩散因素并研究其作用方式。
[背景 ] 水云是已被采纳为这个组的海藻遗传模型生物体一个小的，丝状褐藻（彼得斯等人，2004; Coelho的等人，2012A） 。褐藻显示出广泛的不同生命周期（Cock 等，201 4 ）。腕果具有单倍体-二倍体的生命周期（图1），涉及两个多细胞世代，配子体和孢子体之间的交替（Müller，1967； Bothwell ...
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| A Method to Efficiently Cryopreserve Mammalian Cells on Paper Platforms
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] This protocol describes a simple method to cryopreserve mammalian cells within filter papers as an alternative to conventional slow-freezing approach. The method involves treating paper fibers with fibronectin, using low concentrations of the cryoprotectant dimethyl sulfoxide (DMSO), and slow freezing cells to -80 °C at a 1 °C min-1 rate. In our method, the biocompatibility, large surface area, 3D porosity and fiber flexibility of the paper, in combination with the fibronectin treatment, yield recovery of cells comparable to conventional approaches, with no additional fine-tuning to freezing and thawing procedures. We expect that the paper-based cryopreservation method will bring several advantages to the field of preserving mammalian cells, including accommodation of a higher ...
[摘要] [摘要] 该协议描述了一种简单的方法，可在滤纸中冷冻保存哺乳动物细胞，以替代常规的慢速冷冻方法。该方法包括使用纤连蛋白处理纸纤维，使用低浓度的冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO），然后以1°C min -1的速率将细胞缓慢冷冻至-80°C 。在我们的方法中，纸的生物相容性，大表面积，3D孔隙率和纤维柔韧性与纤连蛋白处理相结合，可产生与传统方法相当的细胞回收率，而无需对冷冻和解冻程序进行额外的微调。我们期望纸质冷冻保存方法这将为保存哺乳动物细胞领域带来几项优势，包括在单位体积内容纳更多数量的细胞，并且释放后无细胞损失。该方法需要最小的存储空间，在该存储空间中，可以将具有大面积的纸平台卷起和/或折叠并存储在库存中，并允许按需方式有效地运输/分配细胞。此外，该方法的另一个特征包括细胞球体和3D细胞培养物的形成和冷冻保存。
[背景] 哺乳动物细胞的成功保存，长期保存，维护和分配是重要的研究领域，目前仍在深入的科学研究中。特别是，冷冻细胞的及时稳定供应与组织工程研究有关，例如细胞培养，药物开发和测试以及再生和生物治疗医学。
当前的常规细胞冷冻保存方案包括缓慢和快速的冷冻和玻璃化（Pegg，2002； Baust 等，2009）。在这些方法中，将各种浓度的冷冻保护剂添加到细胞悬浮液中，然后以低至1°C min -1 ...
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