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Date:
2020-09-20
[Abstract] One of the major histopathological hallmarks of Parkinson’s disease are Lewy bodies (LBs) –cytoplasmic inclusions, enriched with fibrillar forms of the presynaptic protein alpha-synuclein (α-syn). Progressive deposition of α-syn into LBs is enabled by its propensity to fibrillize into insoluble aggregates. We recently described a marked reduction in α-syn fibrillation in vitro upon posttranslational modification (PTM) by the Fic (Filamentation induced by cAMP) family adenylyltransferase HYPE/FICD (Huntingtin yeast-interacting protein E/FICD). Specifically, HYPE utilizes ATP to covalently decorate key threonine residues in α-syn’s N-terminal and NAC (non-amyloid-β component) regions with AMP (adenosine monophosphate), in a PTM termed AMPylation or adenylylation. Status quo in ...
[摘要] [摘要 ] 帕金森氏病的主要组织病理学标志之一是路易体（LB） –细胞质内含物，富含纤维状形式的突触前蛋白α-突触核蛋白（α-syn）。由于α-syn易于原纤维化成不溶性聚集体，因此可以逐步沉积到LBs中。我们最近描述了Fic（由cAMP诱导的细丝化）家族腺苷酸转移酶HYPE / FICD（与亨廷顿酵母相互作用的蛋白E / FICD）在翻译后修饰（PTM）后体外α-syn纤颤的明显减少。具体而言，HYPE利用ATP在称为AMPylation 或adenylylation 的PTM中，以AMP（单磷酸腺苷）共价修饰α-syn's N末端和NAC（非淀粉样β成分）区域中的关键苏氨酸残基。HYPE底物（例如α-syn）的体外AMPyl化反应现状使用多种ATP类似物，包括放射性标记的α - 32 P-ATP 或α - 33 P-ATP，荧光ATP类似物，生物素化ATP类似物（N6- [6-六甲基] -ATP-生物素），以及基于点击化学的烷基-ATP方法检测基于凝胶的AMPylation 。当前描述HYPE介导AMPylation 的分步方案的文献依赖于α - 33 P-ATP核苷酸，而不是更常见的α - 32 P-ATP。尽管有效，但前一种方法需要长时间且危险的DMSO-PPO（二甲基亚砜- 聚苯基恶唑）沉淀。因此，我们提供了基于α - 33 ...
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