| A Robust Mammary Organoid System to Model Lactation and Involution-like Processes
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] The mammary gland is a highly dynamic tissue that changes throughout reproductive life, including growth during puberty and repetitive cycles of pregnancy and involution. Mammary gland tumors represent the most common cancer diagnosed in women worldwide. Studying the regulatory mechanisms of mammary gland development is essential for understanding how dysregulation can lead to breast cancer initiation and progression. Three-dimensional (3D) mammary organoids offer many exciting possibilities for the study of tissue development and breast cancer. In the present protocol derived from Sumbal et al., we describe a straightforward 3D organoid system for the study of lactation and involution ex vivo. We use primary and passaged mouse mammary organoids stimulated with fibroblast growth factor 2 ...
[摘要]
[摘要]乳腺是一种高度动态的组织，在整个生殖生活中都会发生变化，包括青春期的生长以及怀孕和进化的重复周期。乳腺肿瘤诊断代表在世界女性最常见的癌症宽。研究的监管机制乳腺的发育是至关重要的理解荷兰国际集团d如何YS调节可导致乳腺癌的发生和发展。三维（3D）乳腺组织体提供了许多令人激动的可能性的研究的组织发育和乳腺癌。在第E存在衍生自协议Sumbal等人，我们描述一个简单的3D类器官系统的研究的泌乳和复古体外。我们使用成纤维细胞生长因子2 （FGF2）和催乳素刺激的原代和传代小鼠乳腺类器官来模拟小鼠乳腺泌乳和内卷过程的三个周期。这种3D模型类器官代表一个有价值的工具来研究后期产后乳腺的发育和乳腺癌，尤其是产后-相关性乳腺癌。
图形摘要：
乳腺类器官的分离和培养程序
[背景技术]的Th e是乳腺的主要功能是提供营养吨经由牛奶产量Ò新生儿。牛逼乳腺他的发展是主要发生在出生后，由几个因素，包括激素和生长因子调控的一个高度动态的过程（Brisken和拉贾拉姆，2006;斯特恩利希特，2006年）。在青春期，激素和生长因子调节基本的胚胎导管树的导管形态发生（Brisken and ...
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| A Spectrofluorophotometrical Method Based on Fura-2-AM Probe to Determine Cytosolic Ca2+ Level in Pseudomonas syringae Complex Bacterial Cells
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Calcium signaling is an emerging mechanism by which bacteria respond to environmental cues. To measure the intracellular free-calcium concentration in bacterial cells, [Ca2+]i, a simple spectrofluorometric method based on the chemical probe Fura 2-acetoxy methyl ester (Fura 2-AM) is here presented using Pseudomonad bacterial cells. This is an alternative and quantitative method that can be completed in a short period of time with low costs, and it does not require the induction of heterologously expressed protein-based probes like Aequorin. Furthermore, it is possible to verify the properties of membrane channels involved in Ca2+ entry from the extracellular matrix. This method is in particular valuable for measuring [Ca2+]i in the range of 0.1-39.8 µM in small cells like those of ...
[摘要] [摘要]钙信号传导是细菌对环境线索作出反应的一种新兴机制。为了测量细菌细胞中细胞内游离钙的浓度，在此使用假单胞菌细菌细胞，提出一种基于化学探针Fura 2-乙酰氧基甲基酯（Fura 2-AM）的简单分光荧光法[Ca 2+ ] i 。这是一种可替代的定量方法，可在短时间内以低成本完成，并且不需要诱导异源表达的基于蛋白质的探针（如水母发光蛋白）。此外，有可能验证参与Ca 2+从细胞外基质进入的膜通道的特性。该方法对于在像原核生物一样的小细胞中测量[Ca 2+ ] i在0.1-39.8 µM范围内特别有价值。
[背景] Ca 2+是一种新兴的细菌细胞内信使，会影响多种细胞过程，例如维持细胞完整性，细胞分裂（Dominguez等人，2015），运动性（Tisa和Alder，1995；Gode-Potratz等人，2010；Cruz等人，2012；Guragain等人，2013； Parker等人，2015；Fishman等人，2018 ），III型分泌物（DeBord等人，2003；Dasgupta等人，2003）。 ，2006; Gode-Potratz等，2010; Fi shman等，2018），基因表达（Dominguez等，2015），群体感应（Werthén和Lundgren，2001），生物膜形成（Patrauchan等,, 2001）。 2005年; ...
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| Isolation of Murine Primary Aortic Smooth Muscle Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (VSMCs) have been cultured for decades to study the role of these cells in cardiovascular disorders. The most common source of VSMCs is the rat aorta. Here we show the adaptation of this method to isolate and culture mouse aortic VSMCs. The advantage of this method is that there are many more transgenic mouse lines available compared to rats. The protocol consists of the isolation of the aorta, the liberation of vascular cells by the action of collagenase, culturing of VSCMs, and analyzing filamentous actin and alpha smooth muscle actin by fluorescence microscopy. VSCMs can be further used to study mechanisms underlying cardiovascular diseases.
Graphic abstract
Figure 1. Working steps ...
[摘要] [摘要]血管平滑肌细胞（VSMC）已培养了数十年，以研究这些细胞在心血管疾病中的作用。VSMC的最常见来源是大鼠主动脉。在这里，我们展示了此方法对分离和培养小鼠主动脉VSMC的适应性。这种方法的优点是，与大鼠相比，有更多的转基因小鼠系可用。该方案包括主动脉的分离，通过胶原酶的作用释放血管细胞，培养VSCM ，通过荧光显微镜分析丝状肌动蛋白和α平滑肌肌动蛋白。VSCM可进一步用于研究心血管疾病的潜在机制。
图形摘要：
˚F igure 1.工作步骤
关键词：血管平滑肌细胞鼠主动脉提取分离培养
[背景]血管壁细胞（壁细胞）在多种疾病的调节中起着至关重要的作用，从高血压（Rodríguez-Vita等，2005a）和动脉粥样硬化（Rodríguez-Vita等，2008）到癌症（ Wong等人，2020年），甚至最近还有COVID-19 （He等人，2020年）。毛细血管大部分被周细胞覆盖，而较大的血管在血管壁中含有VSCM。壁细胞通过血管收缩和血管舒张来控制血流。这样，吨哎是在几种药物靶，其降低血压（圣保罗等人，2020） ...
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