| In vitro Differentiation of Human iPSC-derived Cardiovascular Progenitor Cells (iPSC-CVPCs)
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Induced pluripotent stem cell derived cardiovascular progenitor cells (iPSC-CVPCs) provide an unprecedented platform for examining the molecular underpinnings of cardiac development and disease etiology, but also have great potential to play pivotal roles in the future of regenerative medicine and pharmacogenomic studies. Biobanks like iPSCORE ( Stacey et al., 2013; Panopoulos et al., 2017), which contain iPSCs generated from hundreds of genetically and ethnically diverse individuals, are an invaluable resource for conducting these studies. Here, we present an optimized, cost-effective and highly standardized protocol for large-scale derivation of human iPSC-CVPCs using small molecules and purification using metabolic selection. We have successfully applied this protocol ...
[摘要] [摘要 ] 诱导性多能干细胞衍生的心血管祖细胞（iPSC-CVPCs）为检查心脏发育和疾病病因的分子基础提供了前所未有的平台，但在再生医学和药物基因组学的未来中也具有重要作用。像iPSCORE这样的生物库（Stacey 等，2013 ；Panopoulos 等，2017）， 其中包含由数百个遗传和种族不同的个体产生的iPSC，是进行这些研究的宝贵资源。在这里，我们为小分子大规模衍生人iPSC-CVPCs和代谢选择纯化提供了一种优化，具有成本效益和高度标准化的方案。我们已经成功地应用了该协议，从154种不同的iPSCORE iPSC品系中获得了iPSC-CVPC，从而获得了大量的高纯度心脏细胞。一个重要的我们的协议的组成部分是Ç ELL Ç onfluency 估计S（ccEstimate ），用于估计当iPSC集单层将达到80％汇合，这是用于发起的iPSC-CVPC推导最佳的时间的自动方法，并且使得协议为易于在具有不同增长率的iPSC系列中使用。此外，我们发现跨iPSC-CVPC的细胞异质性是由于两种截然不同的心脏细胞类型（心肌细胞（CMs）和心外膜衍生细胞（EPDCs））的比例不同导致的，这两种细胞在心脏再生中均具有关键作用。该协议消除了iPSC线到线优化的需要，并且可以轻松地进行调整和扩展，以进行高通量研究或生成大量适用于再生医学应用的细胞。
[背景 ] ...
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| Quantification of the Surface Expression of G Protein-coupled Receptors Using Intact Live-cell Radioligand Binding Assays
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] G protein-coupled receptors (GPCRs) are the most structurally diverse family of signaling proteins and regulate a variety of cell function. For most GPCRs, the cell surface is their functional destination where they are able to respond a wide range of extracellular stimuli, leading to the activation of intracellular signal transduction cascades. Thus, the quantity of receptor expression at the cell surface is a crucial factor regulating the functionality of the receptors. Over the past decades, many methods have been developed to measure the cell surface expression of GPCRs. Here, we describe an intact live-cell radioligand binding assay to quantify the surface expression of GPCRs at the endogenous levels or after overexpression. In this assay, cell cultures will be incubated with ...
[摘要] [摘要] G蛋白偶联受体（GPCR）是信号蛋白中结构最多样化的家族，可调节多种细胞功能。对于大多数GPCR，细胞表面是它们的功能目的地，能够响应广泛的细胞外刺激，从而激活细胞内信号转导级联反应。因此，受体在细胞表面的表达量是调节受体功能的关键因素。在过去的几十年中，已开发出许多方法来测量GPCR的细胞表面表达。在这里，我们描述了完整的活细胞放射性配体结合测定法，以量化内源水平或过表达后GPCR的表面表达。在该测定中，将细胞培养物与特定的细胞不可渗透的放射性配体温育，所述放射性不可配体选择性地和化学计量地结合至各个GPCR，并且通过受体结合的配体的放射性来定量细胞表面的受体数量。 此方法对于测量完整活细胞表面的功能性GPCR具有高度特异性，对于内源性，低丰度的GPCR特别有用。
[背景 ] G蛋白偶联受体（GPCR）构成细胞表面受体的最大超家族，并在生理和病理条件下调节多种细胞功能（Hauser 等人，2017; Hilger 等人，2018; Weinberg和Puthenveedu，2019） ...
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