|
Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Legionella pneumophila, a Gram-negative bacterium and the causative agent of Legionnaires’ disease, exports over 300 effector proteins/virulence factors, through its type II (T2SS) and type IV secretion systems (T4SS). One such T2SS virulence factor, ChiA, not only functions as a chitinase, but also as a novel mucinase, which we believe aids ChiA-dependent virulence during lung infection. Previously published protocols manipulated wild-type L. pneumophila strain 130b and its chiA mutant to express plasmid-encoded GFP. Similarly, earlier studies demonstrated that wheat germ agglutinin (WGA) can be fluorescently labeled and can bind to mucins. In the current protocol, GFP-labeled bacteria were incubated with type II and type III porcine stomach mucins, which were then labeled with ...
[摘要] [摘要]嗜肺军团杆菌是革兰氏阴性细菌，是军团菌病的病原体，通过其II型（T2SS）和IV型分泌系统（T4SS）出口了300多种效应蛋白/毒力因子。一种这样的T2SS毒力因子ChiA不仅起几丁质酶的作用，而且还起新型粘蛋白酶的作用，我们认为它可以在肺部感染期间帮助ChiA依赖性毒力。以前发表的协议操纵野生型肺炎嗜血杆菌130b菌株及其chiA突变体，以表达质粒编码的GFP。同样，较早的研究表明，小麦胚芽凝集素（WGA）可以进行荧光标记，并可以与粘蛋白结合。 在当前方案中，将GFP标记的细菌与II型和III型猪胃粘蛋白孵育，然后用TexasRed标记的WGA进行标记，并通过流式细胞术进行分析，以测量在有或没有HLA的情况下细菌与粘蛋白的结合。内源性ChiA。另外，我们分析了纯化的ChiA与II型和III型猪胃粘蛋白的结合。该方案将细菌和直接蛋白结合到粘蛋白上，并且是第一个使用WGA和流式细胞术分析革兰氏阴性细菌与粘蛋白结合的方法。
图形摘要：
自动生成手机说明的屏幕截图
评估细菌和蛋白质与粘蛋白结合的策略
[背景技术]嗜肺军团菌（LPN ），革兰氏阴性细菌，是军团病，肺炎的严重形式的病原体。L ...
|
|
Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Dynamic histone changes occur as a central part of chromatin regulation. Deposition of histone variants and post-translational modifications of histones are strongly associated with properties of chromatin status. Characterizing the kinetics of histone variants allows important insights into transcription regulation, chromatin maintenance and other chromatin properties. Here we provide a protocol of quantitative and sensitive approaches to test the timing of incorporation and dissociation of histones using a two-color SNAP-labeling system, labelling pre-existing and newly-incorporated histones distinctly. Together with cell cycle synchronization methods and cell cycle markers, this approach enables a pulse-chase analysis to determine the turnover of histone variants during the cell cycle, ...
[摘要] [摘要] 动态的组蛋白变化是染色质调节的核心部分。组蛋白变体的沉积和组蛋白的翻译后修饰与染色质状态的属性密切相关。表征组蛋白变体的动力学特性可为深入了解转录调控，染色质维持和其他染色质特性提供重要信息。在这里，我们提供了一种定量和敏感方法的协议，以使用双色SNAP标记系统测试组蛋白的结合和解离时间，分别标记预先存在的和新结合的组蛋白。结合细胞周期同步方法和细胞周期标志物，这种方法可以进行脉冲追踪分析，以确定在细胞周期内使用成像或流式细胞仪方法以单细胞分辨率检测到的组蛋白变体的周转率。除了测试整体组蛋白更新，还可以使用成像方法解决组蛋白变体的细胞周期依赖性细胞定位。
[背景] 染色质重塑是真核细胞众多基本细胞活动的一部分（Geiman 和Robertson，2002；Clapier 和Cairns ，2009）。转录因子和RNA聚合酶的可及性通常与DNA甲基化和染色质状态的变化相关，包括可及性，翻译后的组蛋白修饰和组蛋白变体的沉积。组蛋白变体差异性地调节调节发育，细胞分化或其他生理活动的基因表达（Banaszynski 等，2010）。它们在DNA修复，端粒维护，异染色质形成和染色质分离中也发挥着不同的作用（Henikoff 和Smith，2015； Zink和Hake，2016）。此外，组蛋白变体的掺入失调与癌症有关（Vardabasso et ...
|