| A High-throughput Interbacterial Competition Platform
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Contact-dependent interbacterial competition is a common strategy used by bacteria to fight for their ecological niches. Interbacterial competition is monitored by a competition assay involving co-culturing the attacker and the recipient bacterial cells on agar, followed by recovery of the surviving recipient cells. Conventional interbacterial competition assays rely on serial dilution, plate spreading, and colony counting experiments for the readout. The high demand for time and labor in a competition assay limits its use for large-scale screening. However, a high-throughput interbacterial competition screening method is required to screen genetic factors involved in an interbacterial competition. Here, using Agrobacterium tumefaciens as an attacker and Escherichia coli ...
[摘要] [摘要 ] 接触依赖性细菌间竞争是细菌争夺生态位的一种常用策略。通过竞争测定法监测细菌间竞争，该竞争测定法包括在琼脂上共同培养攻击者和受体细菌细胞，然后回收存活的受体细胞。常规的细菌竞争分析需要依靠连续稀释，平板铺展和菌落计数实验来进行读数。竞争测定中对时间和劳力的高需求限制了其在大规模筛选中的用途。然而，需要高通量的细菌间竞争筛选方法来筛选参与细菌间竞争的遗传因素。在这里，使用根癌土壤杆菌作为攻击者， 作为大肠埃希菌，我们开发了一种功能强大，快速，高效和高通量的VI型分泌系统依赖性细菌竞争筛选平台。该系统无需进行连续稀释和铺板即可进行96种同时竞争分析。该系统的数据分析仅依赖于直接和直接的菌落计数。该平台可以很容易地用于识别参与任何依赖接触的细菌竞争系统的新因素。
[背景 ] 细菌已经进化出多种策略来对抗其他细菌以获取生态位适应性，而接触依赖性细菌间竞争是广泛使用的策略之一（Granato 等人，2019）。细菌可以使用其I型（T1SS），IV型（T4SS），V型（T5SS），VI型（T6SS）或VII型（T7SS）分泌系统将蛋白毒素输送到其竞争细胞，受体细胞，并以接触依赖的方式杀死它（Aoki 等人，2005; Hood 等人，2010; Souza 等人，2015; Cao 等人，2016;García-Bayona ...
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| Candida albicans Agar Invasion Assays
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The ability of the human fungal pathogen Candida albicans to disseminate into tissues is promoted by a switch from budding to invasive hyphal growth. This morphological transition is stimulated by multiple environmental factors that can vary at different sites of infection. To identify genes that promote invasive growth, C. albicans mutants can be screened for defects in growing invasively into solid agar medium as a substitute for studying tissue invasion. This in vitro approach has advantages in that it permits the media conditions to be varied to mimic different host environments. In addition, the concentration of agar can be varied to determine the effects of altering the rigidity of the matrix into which the cells invade, as this provides a better indicator ...
[摘要] [摘要 ] 人类真菌病原体白色念珠菌传播到组织的能力是由从发芽到侵入性菌丝生长的转换而增强的。多种环境因素可能会刺激这种形态转变，这些环境因素可能在不同的感染部位有所不同。为了鉴定促进侵入growt基因小时，白色念珠菌突变体可以在侵入性生长成固体琼脂培养基作为研究组织侵袭的替代品进行筛选的缺陷。这个体外 该方法的优点在于，它允许改变媒体条件以模仿不同的主机环境。另外，可以改变琼脂的浓度以确定改变细胞侵袭的基质的刚度的作用，因为与液体培养中形成菌丝的能力相比，这提供了更好的侵袭性生长指标。在多种条件下的测试可以用来鉴定具有最强缺陷的突变细胞。因此，将描述用于分析白色念珠菌在不同条件下的侵袭性生长的方案和培养基，其适合于测试突变株白色念珠菌菌株的单个菌株或高通量分析。
[背景 ] 白色念珠菌是一种多形性真菌病原体，可以通过形成芽（小球形细胞），假菌丝细胞（细长细胞链）或菌丝细胞（具有平行平行线的长丝状细胞链）生长（图1）（贵族等人，2017）。已证明宿主中遇到的多种环境刺激可促进向侵袭性生长的转变，包括人体温度（37 °C ），碱性pH，CO 2 ，血清中的因子和糖GlcNAc（N-乙酰氨基葡萄糖） ）（Kornitzer，2019）。萌芽细胞被认为促进胃肠道的血流传播和定植（Pierce和Kumamoto ，2012 ；Witchley ...
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