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Date:
2020-08-20
[Abstract] Stopped-Flow Light Scattering (SFLS) is a method devised to analyze the kinetics of fast chemical reactions that result in a significant change of the average molecular weight and/or in the shape of the reaction substrates. Several modifications of the original stopped-flow system have been made leading to a significant extension of its technical applications. One of these modifications allows the biophysical characterization of the water and solute permeability of biological and artificial membranes.
Here, we describe a protocol of SFLS to measure the glycerol permeability of isolated human red blood cells (RBCs) and evaluate the pharmacokinetics properties (selectivity and potency) of isoform-specific inhibitors of AQP3, AQP7 and AQP9, three mammalian aquaglyceroporins ...
[摘要] [摘要] 停流光散射（SFLS）是一种用于分析快速化学反应动力学的方法，该化学反应导致平均分子量和/或反应底物形状发生显着变化。已对原始停流系统进行了几处修改，从而大大扩展了其技术应用范围。这些修饰之一允许水的生物物理表征以及生物膜和人造膜的溶质渗透性。
在这里，我们描述了一种SFLS协议，用于测量分离的人红细胞（RBC）的甘油渗透性，并评估AQP3，AQP7和AQP9的同种型特异性抑制剂的药代动力学特性（选择性和效价），这三种哺乳动物的水甘油糖蛋白允许转运甘油跨膜。在20°C的SFLS设备中，将RBC的悬浮液（1％的血细胞比容）暴露于100 mM甘油的向内定向，并在530 nm的单色波长下记录120 s的散射光强度变化。该设备的死区时间为1.6毫秒，混合效率在不到1毫秒的时间内达到99％。数据拟合到单指数函数和有关的时间constan 吨（ ，对应于伴随甘油的进入红细胞的水渗透运动的光散射的细胞膨胀相的秒）进行测定。RBC 的甘油渗透系数（P gly ，cm / s）通过以下公式计算：
P gly = 1 / [[（（S / V） ]
其中 （s）是拟合的指数时间常数，S / V是分析的RBC 样本的表面积与体积之比（cm -1 ...
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