| Stopped-flow Light Scattering Analysis of Red Blood Cell Glycerol Permeability
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Stopped-Flow Light Scattering (SFLS) is a method devised to analyze the kinetics of fast chemical reactions that result in a significant change of the average molecular weight and/or in the shape of the reaction substrates. Several modifications of the original stopped-flow system have been made leading to a significant extension of its technical applications. One of these modifications allows the biophysical characterization of the water and solute permeability of biological and artificial membranes.
Here, we describe a protocol of SFLS to measure the glycerol permeability of isolated human red blood cells (RBCs) and evaluate the pharmacokinetics properties (selectivity and potency) of isoform-specific inhibitors of AQP3, AQP7 and AQP9, three mammalian aquaglyceroporins ...
[摘要] [摘要] 停流光散射（SFLS）是一种用于分析快速化学反应动力学的方法，该化学反应导致平均分子量和/或反应底物形状发生显着变化。已对原始停流系统进行了几处修改，从而大大扩展了其技术应用范围。这些修饰之一允许水的生物物理表征以及生物膜和人造膜的溶质渗透性。
在这里，我们描述了一种SFLS协议，用于测量分离的人红细胞（RBC）的甘油渗透性，并评估AQP3，AQP7和AQP9的同种型特异性抑制剂的药代动力学特性（选择性和效价），这三种哺乳动物的水甘油糖蛋白允许转运甘油跨膜。在20°C的SFLS设备中，将RBC的悬浮液（1％的血细胞比容）暴露于100 mM甘油的向内定向，并在530 nm的单色波长下记录120 s的散射光强度变化。该设备的死区时间为1.6毫秒，混合效率在不到1毫秒的时间内达到99％。数据拟合到单指数函数和有关的时间constan 吨（ ，对应于伴随甘油的进入红细胞的水渗透运动的光散射的细胞膨胀相的秒）进行测定。RBC 的甘油渗透系数（P gly ，cm / s）通过以下公式计算：
P gly = 1 / [[（（S / V） ]
其中 （s）是拟合的指数时间常数，S / V是分析的RBC 样本的表面积与体积之比（cm -1 ...
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| Isolation and Quantification of Extracellular DNA from Biofluids
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Date:
2020-08-20
[Abstract] Extracellular DNA is studied as a diagnostic biomarker, but also as a factor involved in the pathophysiology of several diseases due to its pro-inflammatory properties. Extracellular DNA can be extracted from plasma, urine, saliva or other biofluids using standard DNA isolation procedures and specialized commercial kits. Sample preparation for isolation is important, freezing and thawing may affect the amount of extracellular DNA extracted. Subsequent centrifugations remove cells and cell debris from the samples to obtain true extracellular DNA. Small volume of samples especially from animal experiments is often an issue and it affects the DNA yield. Very short fragments (˂ 100 bp) can be lost during isolation and are difficult to quantify using PCR. Fluorometric methods asses all stained ...
[摘要] [摘要 ] 研究细胞外DNA作为一种诊断性生物标志物，但由于其具有促炎性，也可以作为多种疾病的病理生理因素。可以使用标准DNA分离程序和专门的商业试剂盒从血浆，尿液，唾液或其他生物流体中提取细胞外DNA。样品制备对于分离非常重要，冷冻和解冻可能会影响提取的细胞外DNA的量。随后的离心去除样品中的细胞和细胞碎片，以获得真正的细胞外DNA。少量样品尤其是动物实验样品常常是一个问题，它会影响DNA产量。片段很短（˂ 100 bp）在分离过程中可能会丢失，并且难以使用PCR进行定量。荧光法评估所有染色的DNA片段。选择定量细胞外DNA的方法至关重要，并且至少两种方法的组合是理想的。程序的标准化或至少在研究论文中的报告对于比较结果至关重要。
[背景 ] 胞外DNA通常被称为无细胞DNA是所有DNA的一个术语发现特别是在诊断生物流体细胞外。血浆DNA最早是由Mandel和Metais （1948）发现的。后来人们对所谓的液体活检的研究激发了人们对细胞外DNA研究的兴趣，液体活检作为无创筛选和诊断的基于DNA的生物标志物的来源（Poon和Lo，2001）。相同的胞外DNA，然而，也参与炎性疾病，如败血症的病理生理学（Lauková 等人，2017） ，急性肾损伤（詹森等人，2017）和急性肝衰竭（Vokálová ...
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