| Multilayered Fabrication Assembly Technique to Engineer a Corneal Stromal Equivalent
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Tissue engineering has emerged as a strategy to combat the donor shortage of human corneas for transplantation. Synthetic corneal substitutes are currently unable to support the normal phenotype of human cells and so decellularized animal corneas have been deployed to more closely provide the topographical and biochemical cues to promote cell attachment and function. Although full thickness decellularized corneas can support corneal cells, the cells are slow to populate the scaffold and density declines from the surface. To avoid these problems, this protocol describes the stacking of alternate layers of decellularized porcine corneal sheets and cell-laden collagen hydrogel to produce a corneal construct. The sheets are obtained by cryosectioning porcine corneas, decellularizing them with ...
[摘要] [摘要]组织工程学已成为一种解决人类角膜移植供体短缺的策略。合成的角膜替代物目前不能支持人类细胞的正常表型，因此已经使用脱细胞的动物角膜来更紧密地提供地形和生化线索以促进细胞附着和功能。尽管全厚度的脱细胞角膜可以支持角膜细胞，但这些细胞填充支架的速度很慢，并且密度从表面降低。为了避免这些问题，该协议描述了脱细胞层的交替层的堆叠 猪角膜片和载有细胞的胶原蛋白水凝胶可产生角膜构建体。通过将猪角膜冷冻切片，用去污剂和核酸酶使它们脱细胞，最后进行空气干燥以储存和易于制造，从而获得了薄片。然后将角膜基质细胞封装在I型胶原溶液中，并在这些薄片之间进行浇铸。该协议提出了一种快速的方法，以确保仅使用组织来源的材料即可在整个构建体中获得高细胞度。
图形摘要：
获得角膜基质等效物的主要过程概述
[背景]角膜失明影响着全球数百万人，治疗主要依赖于人类供体角膜的移植（Gain等人，2016）。由于这些捐赠是稀缺的，因此需要基于生物材料的组织工程学的替代方案。正在开发各种各样的策略和材料来工程化角膜组织，一种有前途的方法是使用脱细胞的动物角膜（Fernández- Pérez和Ahearne ...
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| Co-culture of Murine Neurons Using a Microfluidic Device for The Study of Tau Misfolding Propagation
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The deposition of misfolded, aggregated tau protein is a hallmark of several neurodegenerative diseases, collectively termed “tauopathies”. Tau pathology spreads throughout the brain along connected pathways in a prion-like manner. The process of tau pathology propagation across circuits is a focus of intense research and has been investigated in vivo in human post-mortem brain and in mouse models of the diseases, in vitro in diverse cellular systems including primary neurons, and in cell free assays using purified recombinant tau protein. Here we describe a protocol that takes advantage of a minimalistic neuronal circuit arrayed within a microfluidic device to follow the propagation of tau misfolding from a presynaptic to a postsynaptic neuron. This assay allows ...
[摘要] [摘要] 错折叠的聚集性tau蛋白的沉积是几种神经退行性疾病的标志，统称为“ tauopathies”。Tau病理以a病毒样方式沿着连接的路径在整个大脑中传播。tau病理学在整个电路中传播的过程是一项深入研究的重点，并且已在人体死后大脑和疾病小鼠模型中进行了体内研究，在包括原代神经元在内的各种细胞系统中进行了体外研究，并使用纯化的重组tau蛋白。在这里，我们描述了一种协议，该协议利用微流控设备中排列的简约神经元回路来跟踪tau错折叠从突触前神经元向突触后神经元的传播。该方法允许高分辨率成像以及释放和接收神经元的单独操作，因此有利于研究tau和其他错折叠蛋白的体外繁殖。
[背景 ] 错折叠的蛋白质在整个大脑中的传播是病理学在多种神经退行性疾病中传播的基础，包括阿尔茨海默氏病，帕金森氏症和Pri病毒病（Goedert 等人，2010；Davis 等人，2018； Hallinan 等人，2019a ）。了解潜在机制可能有助于限制疾病进展，因此是深入研究的领域。存在几种体内和体外测定法来监测该过程，包括对过度表达的突变型人tau产生神经变性的小鼠模型（Allen 等人，2002; Ramsden 等人，2005; Santa Cruz 等人，2005; Gibbons 等人。等人，2017）。体外模型包括表达可监测聚集的生物传感器的细胞系（Kfoury ...
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