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Date:
2020-08-20
[Abstract] Cell-based functional assays are an important part of compound screening and drug lead optimization, and they can also play a crucial role in the determination of the residues involved in ligand binding and signaling for a particular G-protein-coupled receptor. Conventional methods used for Gαq/15-coupled receptors rely on the use of fluorescent probes for Ca++ sensing (such as Fura-2 and Fluo-4) or on the incorporation of [3H]-inositol into inositol 1,4,5- triphosphate (IP3). However, these methods are not suitable for screening large libraries of compounds or for screening several mutants of the same receptor. In contrast, the IP-One assay by Cisbio is a TR-FRET assay suitable for large compound library screening when using stable cell lines that express ...
[摘要] [摘要 ] 基于细胞的功能测定法是化合物筛选和药物先导物优化的重要组成部分，并且它们可以也参与配体结合和信令残留量的测定起到至关重要的作用为一个特定的G蛋白偶联受体。用于Gα常规方法的q / 15 -偶联受体依赖于使用用于钙荧光探针++ 感测（如的Fura-2和的Fluo-4）或上掺入[的3 H] - 肌醇成肌醇1,4- ，5-三磷酸（IP3）。然而，这些方法不适合用于筛选大文库的化合物或用于筛选相同的受体的几个突变体。相反，IP-一个测定由Cisbio公司是TR-FRET测定适合大型化合物文库使用的稳定细胞株的筛选时，表达一个特定7TMR 。但是，当使用瞬时转染的7TMR突变体时，此检测方法并不理想，因为它需要两步操作进行细胞培养。因此，我们已经优化了IP-One的测定使用协议的在384孔反向转染方法的板。这为先前用于筛选Gαq / 15 偶联7TMR 的几种突变体的两步法提供了一种省时和省资源的替代方案。
[背景 ] 七跨膜受体（7TMR），也被称为G蛋白偶联受体，是超家族参与信号转导的最重要的跨膜蛋白。它们是临床批准药物的30％至50％的目标（Overington 等，2006）。Gαq / 15 偶联的7TMR激活磷脂酶Cβ（PLCβ），并产生D-肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）和二酰基甘油（DAG）。IP3触发细胞内Ca ++ ...
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