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Mini-PROTEAN TGX Precast 4-20% resolving gels

Company: Bio-Rad
Catalog#: 456-1094
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract]  Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for efficient transient gene knock-down in model tobacco plant, Nicotiana benthamiana, leaves. Our approach uses one dimensional carbon-based nanomaterials, single-walled carbon nanotubes (SWNTs), to ... [摘要]  [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系,提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA(siRNA)介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上,通过将siRNA序列编码到DNA载体中,将siRNA传递到完整的植物细胞中,然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中,我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物,烟草本塞姆氏烟草,叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料,单壁碳纳米管(SWNTs)来传递siRNA,而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于:i )不需要对siRNA序列进行DNA编码; ii)与非生物方法相比,这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用,并且iii)使用非生物递送时,调节并发症更少方法,其中基因沉默是瞬时的,而无需对植物基因组进行永久性修饰。

图形摘要:

图形抽象标题

[背景技术[ 0002 ]在1990年代初,植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰(RNAi)引起的基因沉默(Van der ...

High-level Production of Recombinant Membrane Proteins Using the Engineered Escherichia coli Strains SuptoxD and SuptoxR
Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract]  We have previously described the development of two specialized Escherichia coli strains for high-level recombinant membrane protein (MP) production. These engineered strains, termed SuptoxD and SuptoxR, are capable of suppressing the cytotoxicity caused by MP overexpression and of producing greatly enhanced MP yields. Here, we present a Bio-protocol that describes gene overexpression and culturing conditions that maximize the accumulation of membrane-integrated and well-folded recombinant MPs in these strains. [摘要]  [摘要] 我们之前已经描述了两种用于生产高水平重组膜蛋白(MP)的大肠杆菌菌株的开发。这些工程菌株,称为SuptoxD和SuptoxR,能够抑制MP过度表达引起的细胞毒性,并产生显著提高的MP产量。在这里,我们提出一个生物协议,描述基因过度表达和培养条件,最大限度地积累膜整合和折叠良好的重组多磺酸粘多糖在这些菌株。

[背景]多磺酸粘多糖在所有活生物体的细胞中执行多种关键功能(Wagner et al.,2006;Schlegel et al.,2010),是当前和未来药物的主要靶点(Yildrim et al.,2007)。获得足够数量的分离蛋白是进行生化和结构研究的前提,这反过来又可以加深对其功能的理解,并发现新的MP靶向药物。

由于多磺酸粘多糖通常在其天然环境中以极低的丰度出现,异源宿主通常用于其重组过表达和随后的纯化。许多不同的系统已被用作原核和真核来源的多种多磺酸粘多糖的过表达宿主(Wagner等人,2006年)。其中,大肠杆菌是最受欢迎的一种,因为它的成本非常低,使用方便(Makino等人,2011年)。事实上,这种细菌已经成功地用于生产储存在蛋白质数据库中的所有重组产生的MP结构的大约20%(Dilworth等人,2018年)。尽管有这些优势和成功,但使用大肠杆菌作为MP生产的异源宿主通常伴随着严重的毒性、低水平的最终生物量和微小的最终产量(Miroux和Walker,1996;Wagner等人,2007;Link等人,2008;Gubellini等人,2011)。 ...

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