| Karyopherin-β2 Inhibits and Reverses Aggregation and Liquid-liquid Phase Separation of the ALS/FTD-Associated Protein FUS
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The study of RNA-binding proteins (RBP) offers insight into the mechanisms of pathologic protein aggregation in neurodegenerative diseases. We developed a protocol for purifying an RBP FUS and a nuclear import receptor (NIR) Kapβ2 and testing the ability of Kapβ2 to mitigate FUS aggregation and liquid-liquid phase separation.
[摘要] [摘要] RNA结合蛋白的研究（RBP）报价洞察病理蛋白聚集的神经变性疾病的机制。我们开发了用于纯化RBP FUS和核输入受体（NIR）Kapβ2 的协议，并测试Kapβ2 减轻FUS聚集和液-液相分离的能力。
[背景] 肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ALS）和额颞叶痴呆（FTD）是神经变性疾病，其特征在于所述错误定位几个RNA结合蛋白的和聚集（RBP）（麦肯齐等人，2010;达克鲁斯和克利夫兰，2011； King 等，2012）。其中一种蛋白是FUS（融合在肉瘤中），一种核蛋白在ALS / FTD患者的神经元细胞质中定位不正确，然后经历液-液相转变，然后发生异常的相转变，形成不溶性聚集体（Altmeyer 等， 2015; Burke 等人，2015; Lin 等人，2015; Molliex 等人，2015; Murakami 等人，2015; Patel 等人，2015）（图1）。Karyopherin-β2（甲β2），一个核输入受体（NIR），已经建立了作为伴侣和disaggregase 蛋白与PY-核定位序列（NLS），诸如FUS（过等人，2018; Hofweber 等人。，2018;吉泽，等人。，2018）。以下方案被开发，以测试的能力甲β2抑制和反向FUS聚合和相分离的离体（过等人，2018）。
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| Buoyant Density Fractionation of Small Extracellular Vesicle Sub-populations Derived from Mammalian Cells
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Small extracellular vesicles (sEVs) encompass a variety of distinct vesicles that are secreted to the extracellular space. Many methodologies currently used for EV isolation (e.g., differential ultracentrifugation concluding in a high-speed pellet, precipitation by macromolecular crowding agents or size excusion chromatography–SEC) do not fractionate distinct sEV sub-populations. Samples obtained by the aforementioned methods are usually used for characterization and physiological studies. However the fraction that contains the molecule of interest or is the carrier of a specific activity is unknown. Therefore isolating distinct sEV sub-populations is critical to understand EV function. The goal of this procedure is to purify distinct sEV sub-populations based on slight ...
[摘要] [摘要] 小细胞外小泡（sEVs）包括分泌到细胞外空间的各种不同的小泡。目前用于EV分离的许多方法（例如，高速颗粒中的差速超速离心、大分子拥挤剂沉淀或尺寸排除色谱法）没有分离不同的sEV亚群。通过上述方法获得的样品通常用于表征和生理学研究。然而，包含感兴趣分子或特定活性载体的部分是未知的。因此，分离不同的sEV亚群对于理解EV功能至关重要。该程序的目的是基于它们浮力密度的微小差异来纯化不同的sEV亚群。此外，该技术还允许从高速颗粒中共同分离的无囊泡RNA蛋白复合物中或通过使用拥挤剂来纯化sEVs。该方案描述了用于收集sEV的哺乳动物细胞的培养、sEV沉淀、sEV亚群的浮力密度分馏和sEV标记的免疫印迹。该方法可用于分离由多种哺乳动物细胞产生的不同的sEV亚群。
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