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Date:
2020-12-20
[Abstract] Immunohistochemistry is a widely used technique to examine the expression and subcellular localization of proteins. This technique relies on the specificity of antibodies and requires adequate penetration of antibodies into tissues. The latter is especially challenging for thick specimens, such as embryos and other whole-mount preparations. Here we describe an improved method of immunohistochemistry for retinal whole-mount preparations. We report that a cocktail of three reagents, Triton X-100, Tween-20, and DMSO, in blocking and antibody dilution buffers strongly enhances immunolabeling in whole-mount retinas from adult zebrafish. In addition, we establish that in whole retinal tissues, a classic epitope retrieval method, based on citrate buffer, is effective for immunolabeling ...
[摘要] Abstra CT ]免疫组织化学是一种广泛使用的技术来检验表达和蛋白质的亚细胞定位。该技术依赖于抗体的特异性，并且需要抗体充分渗透到组织中。对于厚的标本，例如胚胎和其他整装样品，后者尤其具有挑战性。在这里，我们描述了一种用于视网膜整装制剂的免疫组织化学的改进方法。我们报告说，三种试剂鸡尾酒，曲通X - 封闭和抗体稀释缓冲液中的100，Tween-20和DMSO强烈增强了成年斑马鱼整个视网膜中的免疫标记。此外，我们建立了在整个视网膜组织中，基于柠檬酸盐缓冲液的经典表位检索方法，可以有效地免疫标记膜相关蛋白。总的来说，这种简单的修饰可以对视网膜整装中的蛋白质进行精确且可重复的免疫标记。
[背景]为了理解复杂的生物过程，形态学和组织学分析能够进行切合实际的定性和quantitativ ë接近。免疫组织化学是一种用于可视化细胞内和细胞外蛋白表达和定位的强大技术。尽管常规组织学切片可提供高分辨率的免疫染色蛋白图像，但对3维组织进行切片会导致组织结构保存不佳。在各节中，不容易理解完整的细胞结构和对蛋白质3维分布的完整理解。相反，整装制剂可提供大量3D信息，包括完整的细胞结构以及复杂组织中细胞和分子的空间关系。然而，使免疫组织化学适合与完整组织一起使用通常会导致抗体的渗透性差，导致标记不完全和高度的非特异性背景。
在视网膜，径向M的细胞体ü米勒胶质细胞跨度视网膜的整个厚度（Bringmann等人，2006）。小胶质细胞是中枢神经系统的先天免疫细胞，具有小的细胞体和分叉的过程，分布在整个视网膜实质中（Li等人，2015; ...
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