|
Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Cell signalling, cell secretion, and plasma membrane repair are processes that critically rely on intracellular vesicles, important components of the endocytic and secretory pathways. More specifically, the strategic distribution of intracellular vesicles is important for diverse cellular processes. The method presented here is a simple, affordable, and efficient tool to analyze the distribution of intracellular vesicles such as lysosomes, endosomes, Golgi vesicles or secretory granules under different experimental conditions. The method is an accessible way to analyze the density and dispersion of intracellular vesicles by combining immunofluorescence with pixel-based quantification software (e.g., ImageJ/FIJI). This protocol can be used widely within the scientific community ...
[摘要] [摘要]细胞信号传导、细胞分泌和质膜修复是严重依赖于细胞内小泡的过程，这些小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分。更具体地说，细胞内囊泡的策略性分布对不同的细胞过程非常重要。该方法是一种简单、经济、有效的分析溶酶体、内体、高尔基体或分泌颗粒等细胞内囊泡分布的工具。该方法是通过结合免疫荧光和基于像素的量化软件（例如ImageJ/FIJI）来分析细胞内囊泡的密度和分散度的一种简便方法。该协议可以在科学界广泛使用，因为它利用了ImageJ/FIJI，一个免费的开源软件。通过追踪荧光囊泡相对于细胞核的位置，我们能够量化和分析它们在整个细胞中的分布。
[背景]细胞内小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分，负责维持细胞的一些重要功能。因此，许多研究集中在生理和病理条件下调控囊泡分布的途径，而其他研究则探讨了在许多重要的细胞过程中囊泡分布异常的后果。
1988年，Aunis和Bader发现分泌细胞中存在两个分泌小泡池（Aunis和Bader，1988）。第一个小池位于质膜下方，分泌不受细胞骨架的调节，而是由于与细胞骨架中的元素结合而附着在质膜上；第二个池子附着在肌动蛋白细丝上，略远离细胞膜，当第一池耗尽后，可被动员到质膜的内小叶上。这是通过膜的去极化、肌动蛋白丝的重排和细胞骨架屏障的溶解来实现的，从而使其从细胞骨架上脱离，到达胞外部位。
...
|