| Flow Cytometry of CD14, VDR, Cyp27 and Cyp24 and TLR4 in U937 Cells
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Chronic Kidney Disease (CKD) patients present a micro inflammation state due to failure renal function. The calcitriol has been described as an anti-inflammatory factor that might modulates the inflammatory response in CKD patients. However, these patients have deficiency of Calcitriol due to failure renal function. But, synthesis of this vitamin has been reported in extra renal production, as in monocytes. In this context, it has been reported that the supplementation with 25 vitamin D (calcidiol or inactive form of vitamin D) induces monocytes to downregulate inflammation, due to the intracellular 1α-hidroxilase that converts calcidiol to calcitriol in these cells. Besides some reports used RT-qPCR, Western Blot or immunofluorescence techniques to investigate the expression of ...
[摘要] [摘要] 慢性肾脏病（CKD）患者由于肾功能衰竭而出现微炎症状态。骨化三醇被认为是一种抗炎因子，可能调节CKD患者的炎症反应。然而，这些患者由于肾功能衰竭而出现骨化三醇缺乏症。但是，据报道，这种维生素的合成是在肾外产生的，比如在单核细胞中。在这种情况下，有报道称，补充25维生素D（钙二醇或不活跃形式的维生素D）可诱导单核细胞下调炎症反应，这是由于细胞内的1α-羟脯氨酸酶将钙二醇转化为骨化三醇。本研究除采用RT-qPCR、Western-Blot或免疫荧光技术研究炎症和维生素D机械生物标志物在几种疾病中的表达外，本研究还应用流式细胞术技术评价25种维生素D对CD14、Toll样受体4（TLR4）、维生素D受体（VDR）的影响，单核细胞系（U937）中的1-α羟化酶（CYP27）、24-羟化酶（CYP24）。将U937培养物与健康或CKD血清孵育，用或不加25维生素D（50 ng/ml，24 h）处理，以评估CD14、TRL4、VDR、CYP27和CYP24的表达。该方案显示了研究25维生素D处理对细胞内和细胞膜生物标志物表达的影响的优势。此外，与RT-qPCR、westernblot或免疫荧光法相比，该技术不费力，但易于操作和解释。
[背景] ...
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| Generation of Functional Mouse Hippocampal Neurons
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Primary culture of mouse hippocampal neurons is a very useful in vitro model for studying neuronal development, axonal and dendritic morphology, synaptic functions, and many other neuronal features. Here we describe a step-by-step process of generating primary neurons from mouse embryonic hippocampi (E17.5/E18.5). Hippocampal neurons generated with this protocol can be plated in different tissue culture dishes according to different experimental aims and can produce a reliable source of pure and differentiated neurons in less than one week. This protocol covers all the steps necessary for the preparation, culture and characterization of the neuronal culture, including the illustration of dissection instruments, surgical procedure for embryos’ isolation, culturing conditions and ...
[摘要] [摘要] 原代培养小鼠海马神经元是一种非常有用的体外模型用于研究神经元的发育，轴突和树突的形态，突触功能，以及许多其他神经元的特征。这里我们描述了从小鼠胚胎海马（E17.5/E18.5）产生初级神经元的一步一步的过程。根据不同的实验目的，用该方法产生的海马神经元可以在不同的组织培养皿中进行培养，并能在不到一周的时间内产生一个可靠的来源。该方案涵盖了神经元培养物的制备、培养和鉴定的所有必要步骤，包括解剖器械的说明、胚胎分离的手术程序、培养条件以及培养物纯度和分化的评估。通过分析培养6天时的钙显像动力学来评估神经元的活性。
[背景] 海马体是一个非常典型的大脑结构，对重要的大脑功能如记忆、空间导航、情绪记忆和学习至关重要。从解剖学上讲，小鼠海马体有一个清晰的C形结构，很容易定位和分离。在细胞水平上，它主要由锥体细胞组成，与其他脑区相比，中间神经元和胶质细胞较少（Kaech和Banker，2006）。因此，海马体是从野生型或基因工程小鼠模型中产生高纯度原代神经元培养物的理想区域，可用于疾病建模或研究神经元功能的多个方面，如突触传递和电生理特性、对神经毒性的敏感性，分化与衰老（；；；；）。Busche，2018Koyama和Ikegaya，2018Molnar，2011Wu等人，2019Rush等人，2020年
已经制定了许多协议，通过与神经胶质喂食器共同培养神经元来产生皮层和海马神经元（Kaech和Banker，2006），描述了用水凝胶微纤维封装的星形胶质细胞的三维神经元培养系统（Kim等人，2020年），长期向培养基中补充生长因子神经元培养（Ray ...
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