| Quantitative Measurement of Mucolytic Enzymes in Fecal Samples
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] The mucus layer in the gastrointestinal tract covers the apical surface of intestinal epithelial cells, protecting the mucosal tissue from enteric pathogen and commensal microorganisms. The mucus is primarily composed of glycosylated protein called mucins, which are produced by goblet cells, a type of columnar epithelial cells in the intestinal tract. Defective mucin barrier facilitates infection caused by enteric pathogen and triggers inflammation due to invasion of commensal or opportunistic pathogens into the intestinal epithelial mucosa. Several bacterial species in the gut produce enzymes that are capable of degradation of the mucus. Defective mucin production or increased abundance of mucolytic bacteria are clinically linked to inflammatory bowel disease. Measurement of mucolytic ...
[摘要] [摘要]胃肠道粘液层覆盖了肠上皮细胞的顶端表面，保护了粘膜组织免受肠道病原体和共生微生物的侵害。粘液主要由称为粘蛋白的糖基化蛋白组成，其由杯状细胞产生，杯状细胞是肠道中的一种柱状上皮细胞。缺陷性粘蛋白屏障促进由肠道病原体引起的感染并由于共生或机会病原体侵入肠道上皮粘膜而引发炎症。在肠道中几种细菌物种产生的酶即能够降解的 黏液 临床上，粘蛋白产生缺陷或粘液溶解细菌丰度增加与炎症性肠病有关。因此，粪便中粘液溶解酶的测定可能与肠道疾病的临床和实验研究有关。在这里，我们描述了粪便样品中粘液分解酶活性的分步测量方法。
[背景]胃肠道（GI）是数万亿个微生物的家园，这些微生物在生理过程中发挥着不同的功能（Sommer和Backhed ，2011年）。共生肠道菌群过程未消化的食物，提供能量，营养物质和维生素，激活的免疫系统，和防止病原体感染肠道粘膜组织（圆形和Mazmanian ，2009;皮卡德等人。，2017）。尽管有这些有益的作用，但是当肠道共生微生物有机会对肠道上皮屏障进行定殖并侵入粘膜组织时，它们仍可能是机会病原体。然而，整个肠道上皮细胞顶表面上方的凝胶状粘液层确保了共生微生物与肠道粘膜组织的物理分离，并有助于维持肠道的稳态（Pullan等，1994；Linden等，2008；Landen等，2008；Landen等，2008）。Atuma等，2011 ...
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| Relative Quantification of NaV1.1 Protein in Mouse Brains Using a Meso Scale Discovery-Electrochemiluminescence (MSD-ECL) Method
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Densitometric analysis is often used to quantify NaV1.1 protein on immunoblots, although the sensitivity and dilution linearity of the method are usually poor. Here we present a protocol for quantification of NaV1.1 in mouse brain tissues using a Meso Scale Discovery-Electrochemiluminescence (MSD-ECL) method. MSD-ECL is based on ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and uses electrochemiluminescence to produce measurable signals. Two different antibodies are used in this assay to capture and detect NaV1.1 respectively in brain tissue lysate. The specificity of the antibodies is confirmed by Scn1a gene knock-out tissue. The calibration curve standards used in this assay were generated with mouse liver lysate spiked with mouse brain lysate, instead of using a recombinant protein. We ...
[摘要] [摘要]尽管该方法的灵敏度和稀释度线性通常较差，但经常使用光密度分析法定量免疫印迹上的Na V 1.1蛋白。这里瓦特E存在的Na进行定量的协议V在使用小鼠脑组织1.1细观量表发现-电化学发光（MSD-ECL）方法。MSD-ECL基于ELISA（酶联免疫吸附测定），并使用电化学发光产生可测量的信号。此测定法中使用了两种不同的抗体来捕获和检测Na V 1.1分别在脑组织中溶解。Scn1a基因敲除组织证实了抗体的特异性。此测定法中使用的校准曲线标准品是用掺有小鼠脑裂解液的小鼠肝裂解液而不是重组蛋白生成的。我们证明该方法是合格的，可用于特异性，准确度和精密度定量的小鼠脑组织中的Na V 1.1 。
[背景]的Na V 1.1，也称为电压门控钠通道的α亚基，I型，是一种跨膜通过对编码蛋白SCN1A基因（Meisler等人，2010 ）。功能性Na V 1.1的表达降低会导致Dravet综合征（DS），这是一种严重的早发性癫痫性脑病（Dravet等，2005）。Na V 1.1在生物样品中的表达已用作DS的非临床药理生物标记物，可以使用免疫印迹的光密度分析进行测量。密度测定法通常不如标准免疫测定法准确和灵敏。此外，由于蛋白质序列的同源性，某些Na V 1.1抗体可能会与其他电压门控钠通道（VGSC）发生交叉反应，包括Na V 1.2，Na V 1.3和Na ...
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| Calcein Release Assay to Measure Membrane Permeabilization by Recombinant Alpha-Synuclein
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Lipid membranes are involved in regulating biochemical and biological processes and in modulating the selective permeability of cells, organelles, and vesicles. Membrane composition, charge, curvature, and fluidity all have concerted effects on cellular signaling and homeostasis. The ability to prepare artificial lipid assemblies that mimic biological membranes has enabled investigators to obtain considerable insight into biomolecule-membrane interactions. Lipid nanoscale assemblies can vary greatly in size and composition and can consist of a single lipid monolayer, a bilayer, or other more complex assemblies. This structural diversity makes liposomes suitable for a wide variety of biochemical and clinical applications. Here, we describe a calcein dye leakage assay that we have developed ...
[摘要] [摘要] 脂质膜参与调节生物化学和生物过程，并调节细胞，细胞器和囊泡的选择性通透性。膜的组成，电荷，曲率和流动性均对细胞信号传导和体内平衡具有协同作用。制备模拟生物膜的人工脂质组装体的能力使研究人员能够深入了解生物分子与膜之间的相互作用。脂质纳米级装配体的大小和组成可以有很大不同，并且可以由单个脂质单层，双层或其他更复杂的装配体组成。这种结构上的多样性使脂质体适用于多种生化和临床应用。在这里，我们描述了一种钙黄绿素染料泄漏测定法，该测定法已开发用于监测磷脂酰小泡被α-突触核蛋白（ αSyn）破坏，α-突触核蛋白是一种突触前蛋白，在帕金森氏病（PD）中起着重要作用。我们目前的数据显示的效果腺苷酰化的α Syn的上α 的Syn 介导囊泡破裂，例如，此法可用于研究基因突变或翻译后修饰的作用，对α 的Syn -membrane相互作用，以确定蛋白质结合合作伙伴或扰乱这些相互作用的化学实体，并以研究的渗透活动不同血脂的影响α Syn 或其他任何蛋白质。
背景技术脂质体是由于脂质头基团和脂肪酸侧链之间的亲水和疏水相互作用而形成的纳米级脂质组装体。这些生物膜模仿脂质双层组件是研究蛋白质生物分子的膜相互作用的有用工具，这是由于：（i ）调节脂质体直径的灵活性，从而调节膜曲率；（ii）控制脂质成分（Ahmed 等，2019；Siontorou ...
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