| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| In vitro Induction and Detection of Acrosomal Exocytosis in Human Spermatozoa
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The acrosome reaction is a highly regulated exocytotic event that primes spermatozoa for successful fertilization. Upon induction, acrosomal exocytosis proceeds via a wave of vesiculation that radiates across the sperm head, destabilizing the acrosomal vesicle and resulting in the release of the acrosomal contents. Having shed their acrosome, spermatozoa are then capable of penetrating the outer vestments of the oocyte and initiating fertilization. Accordingly, the failure of spermatozoa to complete an acrosome reaction represents a relatively common etiology in male infertility patients, and the ability to induce acrosomal exocytosis has found clinical utility in the evaluation of sperm fertilizing capacity. Here, we firstly describe protocols for driving the capacitation of human ...
[摘要] [摘要 ] 顶体反应是高度调控的胞吐事件，引发精子成功受精。诱导后，顶体胞吐作用通过一束囊泡波进行，该囊泡波辐射穿过精子头部，使顶体囊泡不稳定并导致顶体内容物释放。脱去顶体后，精子便能够穿透卵母细胞的外衣并开始受精。因此，在男性不育患者中，精子不能完成顶体反应代表了相对普遍的病因，并且诱导顶体胞吐作用的能力已在评估精子受精能力中发现了临床用途。在这里，我们首先描述驱动人类精子获能的方案 在体外使用化学成分确定的培养基以引发细胞完成顶体胞吐作用。然后，我们描述了常规用于诱导结合了生理激动剂（即甾体激素，孕酮）或药理试剂（即二价阳离子离子载体，A23187）的顶体胞吐作用的方法。最后，我们描述了组织化学和免疫荧光技术的应用，这些技术可用于研究顶体反应的完成。这样的协议对于临床和男科学研究实验室中的精子功能测试具有重要的诊断实用性。
[背景 ] 顶配体是雄性配子所特有的，是一种溶酶体样的膜细胞器，装饰在精子头部的前部区域，并由顶体内膜和外膜描绘（Hermo 等人，2010a和2010b）。如此形成的顶体囊泡封装了无数的结构和酶促组分，将其分隔为可溶或不可溶级分（Guyonnet 等，2012； Guyonnet 等，2014）。这些中的后者，称为顶体基质，用作稳定的支架，其允许在顶体反应期间受控释放受精所必需的基质相关蛋白（Guyonnet ...
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| Preparing Immunolocalization Slides of Maize Meiotic Chromosomes for Three-dimensional Microscopy
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The protocol provides fully detailed steps for preparing microscopic slides of acrylamide-embedded maize meiotic cells. This method is particularly useful for examining chromatin structure and chromosome arrangement without destroying the three-dimensional organization of the nucleus.
[摘要] [摘要] 该协议提供了制备丙烯酰胺包埋的玉米减数分裂细胞显微玻片的完整详细步骤。该方法对于检查染色质结构和染色体排列而不破坏细胞核的三维结构特别有用。
[背景] 减数分裂是一个动态过程，涉及同源染色体配对，突触和重组。用于研究减数分裂蛋白的定位和动力学的细胞学分析对于了解这些过程的细节至关重要。在许多显微载玻片制备方法中，空间染色质的组织受到机械加工或化学溶剂的破坏。在这里，我们描述了三维显微镜协议，以分析染色质结构和减数分裂蛋白的定位，而不会干扰核组织。
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