| Ligand and Carbohydrate Engagement (LACE) Assay and Fluorescence Quantification on Murine Neural Tissue
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] The interaction between cell surface heparan sulphate and diffusible ligands such as FGFs is of vital importance for downstream signaling, however, there are few techniques that can be used to investigate this binding event. The ligand and carbohydrate engagement (LACE) assay is a powerful tool which can be used to probe the molecular interaction between heparan sulphate and diffusible ligands and can detect changes in binding that may occur following genetic or pharmacological intervention. In this protocol we describe an FGF17:FGFR1 LACE assay performed on embryonic mouse brain tissue. We also describe the method we have used to quantify changes in fluorescent LACE signal in response to altered HS sulphation.
[摘要] [摘要]细胞表面硫酸乙酰肝素与可扩散配体（例如FGFs）之间的相互作用对于下游信号传导至关重要，但是，很少有技术可用于研究这种结合事件。配体和碳水化合物结合（LACE）分析是一种功能强大的工具，可用于探测硫酸乙酰肝素与可扩散配体之间的分子相互作用，并可检测在遗传或药理学干预后可能发生的结合变化。在此协议中，我们描述了在胚胎小鼠脑组织上进行的FGF17：FGFR1 LACE分析。我们还描述了我们用来量化荧光LACE信号响应HS硫酸盐改变的变化的方法。
[背景]硫酸乙酰肝素（HS）是一种细胞外基质和细胞表面糖胺聚糖分子，可通过硫酸化进行广泛修饰。HS与包括FGF，Wnt，BMP和Slits在内的多种具有重要发展意义的信号分子相互作用。例如，在FGF信号传导期间，HS充当共受体，促进FGF配体与细胞表面FGFR受体的结合。此形成HS：FGF：FGFR需要复杂的对FGF信号发生（阿伦等人，2001） 。已显示HS的差异硫酸化会影响FGF配体与其FGFR细胞表面受体的结合。在我们最近的论文中，我们使用了配体和碳水化合物结合（LACE）分析方法来检测HS和FGF蛋白之间的相互作用（Clegg et ...
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| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for efficient transient gene knock-down in model tobacco plant, Nicotiana benthamiana, leaves. Our approach uses one dimensional carbon-based nanomaterials, single-walled carbon nanotubes (SWNTs), to ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
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| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle growth and repair. Here, we describe a protocol for isolating MuSCs from skeletal muscles of mice for in vitro analysis. In addition, we provide a detailed protocol on how to culture and ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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