| A Parkinson’s Disease-relevant Mitochondrial and Neuronal Morphology High-throughput Screening Assay in LUHMES Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Parkinson’s disease is a devastating neurodegenerative disorder affecting 2-3% of the population over 65 years of age. There is currently no disease-modifying treatment. One of the predominant pathological features of Parkinson’s disease is mitochondrial dysfunction, and much work has aimed to identify therapeutic compounds which can restore the disrupted mitochondrial physiology. However, modelling mitochondrial dysfunction in a disease-relevant model, suitable for screening large compound libraries for ameliorative effects, represents a considerable challenge. Primary patient derived cells, SHSY-5Y cells and in vivo models of Parkinson’s disease have been utilized extensively to study the contribution of mitochondrial dysfunction in Parkinson’s. Indeed many ...
[摘要] [摘要]帕金森氏病是一种破坏性神经退行性疾病，影响65岁以上人口的2-3％。目前尚无改善疾病的治疗方法。帕金森氏病的主要病理特征之一是线粒体功能障碍，许多工作旨在鉴定可恢复破坏的线粒体生理的治疗性化合物。然而，在疾病相关模型中对线粒体功能障碍进行建模，适用于筛选大型化合物文库的改善作用，这是一个巨大的挑战。病人原代细胞，SHSY-5Y细胞和体内 帕金森氏病模型被广泛用于研究线粒体功能障碍在帕金森氏症中的作用。确实，许多研究已经利用LUHMES细胞研究帕金森氏病，但是，尽管与其他常用模型相比，LUHMES细胞与其他常用模型相比具有多种优势，例如快速分化和高均一性，但以前并未用作PD相关的线粒体功能障碍的复合筛选模型。 （例如，与来自iPSC的神经元相反），以及与人类中脑组织相关的生理学，能够分化为高度表达特征性标记的多巴胺能样神经元。在先前产生GFP + -LUHMES细胞以模拟代谢功能障碍后，我们报道了在PD相关的线粒体功能障碍恢复模型中使用GFP + -LUHMES细胞进行高通量化合物筛选的方案。该协议描述了通过评估一系列线粒体和神经元形态学参数，使用强大且可重现的毒素诱导的GFP + -LUHMES细胞模型进行高通量化合物筛选的方法。我们还提供了有关数据和统计分析的详细说明，包括Z'得分的示例计算，以评估独立实验中的统计效应大小。
[背景]帕金森氏病（PD）是一种神经退行性疾病，其主要特征是中脑黑质中多巴胺能神经元的丢失以及神经元内包涵体中α-突触核蛋白的积累。它是第二种最常见的神经退行性疾病，影响65岁以上人口中2-3％的人口（Poewe ...
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| In vitro Induction and Detection of Acrosomal Exocytosis in Human Spermatozoa
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The acrosome reaction is a highly regulated exocytotic event that primes spermatozoa for successful fertilization. Upon induction, acrosomal exocytosis proceeds via a wave of vesiculation that radiates across the sperm head, destabilizing the acrosomal vesicle and resulting in the release of the acrosomal contents. Having shed their acrosome, spermatozoa are then capable of penetrating the outer vestments of the oocyte and initiating fertilization. Accordingly, the failure of spermatozoa to complete an acrosome reaction represents a relatively common etiology in male infertility patients, and the ability to induce acrosomal exocytosis has found clinical utility in the evaluation of sperm fertilizing capacity. Here, we firstly describe protocols for driving the capacitation of human ...
[摘要] [摘要 ] 顶体反应是高度调控的胞吐事件，引发精子成功受精。诱导后，顶体胞吐作用通过一束囊泡波进行，该囊泡波辐射穿过精子头部，使顶体囊泡不稳定并导致顶体内容物释放。脱去顶体后，精子便能够穿透卵母细胞的外衣并开始受精。因此，在男性不育患者中，精子不能完成顶体反应代表了相对普遍的病因，并且诱导顶体胞吐作用的能力已在评估精子受精能力中发现了临床用途。在这里，我们首先描述驱动人类精子获能的方案 在体外使用化学成分确定的培养基以引发细胞完成顶体胞吐作用。然后，我们描述了常规用于诱导结合了生理激动剂（即甾体激素，孕酮）或药理试剂（即二价阳离子离子载体，A23187）的顶体胞吐作用的方法。最后，我们描述了组织化学和免疫荧光技术的应用，这些技术可用于研究顶体反应的完成。这样的协议对于临床和男科学研究实验室中的精子功能测试具有重要的诊断实用性。
[背景 ] 顶配体是雄性配子所特有的，是一种溶酶体样的膜细胞器，装饰在精子头部的前部区域，并由顶体内膜和外膜描绘（Hermo 等人，2010a和2010b）。如此形成的顶体囊泡封装了无数的结构和酶促组分，将其分隔为可溶或不可溶级分（Guyonnet 等，2012； Guyonnet 等，2014）。这些中的后者，称为顶体基质，用作稳定的支架，其允许在顶体反应期间受控释放受精所必需的基质相关蛋白（Guyonnet ...
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