| Quantification of the Surface Expression of G Protein-coupled Receptors Using Intact Live-cell Radioligand Binding Assays
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] G protein-coupled receptors (GPCRs) are the most structurally diverse family of signaling proteins and regulate a variety of cell function. For most GPCRs, the cell surface is their functional destination where they are able to respond a wide range of extracellular stimuli, leading to the activation of intracellular signal transduction cascades. Thus, the quantity of receptor expression at the cell surface is a crucial factor regulating the functionality of the receptors. Over the past decades, many methods have been developed to measure the cell surface expression of GPCRs. Here, we describe an intact live-cell radioligand binding assay to quantify the surface expression of GPCRs at the endogenous levels or after overexpression. In this assay, cell cultures will be incubated with ...
[摘要] [摘要] G蛋白偶联受体（GPCR）是信号蛋白中结构最多样化的家族，可调节多种细胞功能。对于大多数GPCR，细胞表面是它们的功能目的地，能够响应广泛的细胞外刺激，从而激活细胞内信号转导级联反应。因此，受体在细胞表面的表达量是调节受体功能的关键因素。在过去的几十年中，已开发出许多方法来测量GPCR的细胞表面表达。在这里，我们描述了完整的活细胞放射性配体结合测定法，以量化内源水平或过表达后GPCR的表面表达。在该测定中，将细胞培养物与特定的细胞不可渗透的放射性配体温育，所述放射性不可配体选择性地和化学计量地结合至各个GPCR，并且通过受体结合的配体的放射性来定量细胞表面的受体数量。 此方法对于测量完整活细胞表面的功能性GPCR具有高度特异性，对于内源性，低丰度的GPCR特别有用。
[背景 ] G蛋白偶联受体（GPCR）构成细胞表面受体的最大超家族，并在生理和病理条件下调节多种细胞功能（Hauser 等人，2017; Hilger 等人，2018; Weinberg和Puthenveedu，2019） ...
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| Intestinal Enteroid Culture for Human Astroviruses
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Human astroviruses (HAstV) are non-enveloped, positive-sense single stranded RNA viruses that typically cause gastroenteritis in children, the elderly and among immunocompromised individuals. Some HAstV species have also been implicated in neurological diseases. It is important to study these viruses to understand the pathogenesis and develop therapeutics. Here we describe HAstV infection in epithelium-only human intestinal enteroids (HIE) isolated from biopsy-derived intestinal crypts. Although different HAstV clades have been propagated in transformed immortalized cell lines such as A549, Caco-2, HEK293T and Huh7.5, we chose HIE because they better mimic the human intestine and thus are more physiologically relevant. Additionally, HIE support the replication of all HAstV clades ...
[摘要] [摘要] 人类星状病毒（HAstV）是一种非包膜，正向单链RNA病毒，通常会导致儿童，老年人和免疫力低下的人群中的肠胃炎。一些HAstV物种也与神经系统疾病有关。研究这些病毒以了解其发病机理并开发治疗方法非常重要。在这里我们描述HAstV感染 从活检来源的肠隐窝中分离出的仅上皮的人肠小肠类固醇（HIE）。尽管已经在转化的永生化细胞系（例如A549，Caco-2，HEK293T和Huh7.5）中繁殖了不同的HAstV进化枝，但我们选择HIE是因为它们可以更好地模仿人的肠道，因此在生理上更相关。此外，HIE支持所有HAstV进化枝的复制，包括临床样品，因此使HIE成为研究HAstV生物学的有价值的潜在通用模型。
[背景] 人类星状病毒（HAstV）是高度流行的肠病毒，会引起从腹泻到脑炎的广泛感染。无症状，全身和肠道外感染很常见（Madeley和Cosgrove 1975；Bosch 等人，2014；Kolawole 等人，2019）。尽管具有医学重要性，但H AstV 是一些特征最弱的肠病毒。目前，已识别出三组人类AstV：经典HAstV和非经典HAstV-MLB（墨尔本），以及HAstV-VA / ...
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