| Generation of Functional Mouse Hippocampal Neurons
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Primary culture of mouse hippocampal neurons is a very useful in vitro model for studying neuronal development, axonal and dendritic morphology, synaptic functions, and many other neuronal features. Here we describe a step-by-step process of generating primary neurons from mouse embryonic hippocampi (E17.5/E18.5). Hippocampal neurons generated with this protocol can be plated in different tissue culture dishes according to different experimental aims and can produce a reliable source of pure and differentiated neurons in less than one week. This protocol covers all the steps necessary for the preparation, culture and characterization of the neuronal culture, including the illustration of dissection instruments, surgical procedure for embryos’ isolation, culturing conditions and ...
[摘要] [摘要] 原代培养小鼠海马神经元是一种非常有用的体外模型用于研究神经元的发育，轴突和树突的形态，突触功能，以及许多其他神经元的特征。这里我们描述了从小鼠胚胎海马（E17.5/E18.5）产生初级神经元的一步一步的过程。根据不同的实验目的，用该方法产生的海马神经元可以在不同的组织培养皿中进行培养，并能在不到一周的时间内产生一个可靠的来源。该方案涵盖了神经元培养物的制备、培养和鉴定的所有必要步骤，包括解剖器械的说明、胚胎分离的手术程序、培养条件以及培养物纯度和分化的评估。通过分析培养6天时的钙显像动力学来评估神经元的活性。
[背景] 海马体是一个非常典型的大脑结构，对重要的大脑功能如记忆、空间导航、情绪记忆和学习至关重要。从解剖学上讲，小鼠海马体有一个清晰的C形结构，很容易定位和分离。在细胞水平上，它主要由锥体细胞组成，与其他脑区相比，中间神经元和胶质细胞较少（Kaech和Banker，2006）。因此，海马体是从野生型或基因工程小鼠模型中产生高纯度原代神经元培养物的理想区域，可用于疾病建模或研究神经元功能的多个方面，如突触传递和电生理特性、对神经毒性的敏感性，分化与衰老（；；；；）。Busche，2018Koyama和Ikegaya，2018Molnar，2011Wu等人，2019Rush等人，2020年
已经制定了许多协议，通过与神经胶质喂食器共同培养神经元来产生皮层和海马神经元（Kaech和Banker，2006），描述了用水凝胶微纤维封装的星形胶质细胞的三维神经元培养系统（Kim等人，2020年），长期向培养基中补充生长因子神经元培养（Ray ...
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| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle growth and repair. Here, we describe a protocol for isolating MuSCs from skeletal muscles of mice for in vitro analysis. In addition, we provide a detailed protocol on how to culture and ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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