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Date:
2019-04-20
[Abstract] Northern blot is a molecular biology technique that can detect, quantify, and determine the molecular weight of RNA. Recently, we published a protocol utilizing near-infrared (IR) fluorescent probes in Northern blot (irNorthern). Our method is as sensitive as other non-radioactive methods but is more straightforward and versatile. Additionally, we found that IR-labeled probes can be used to multiplex or detect different species of RNA at the same time. Here we describe three methods for generating an IR-labeled probe as well as how to perform irNorthern blot. In conclusion, our irNorthern protocol offers a convenient method for RNA detection.
[摘要] Northern blot是一种分子生物学技术，可以检测，定量和确定RNA的分子量。 最近，我们在Northern blot（irNorthern）中发表了一种利用近红外（IR）荧光探针的方案。 我们的方法与其他非放射性方法一样敏感，但更直接，更通用。 此外，我们发现IR标记的探针可以同时用于多重或检测不同种类的RNA。 在这里，我们描述了三种生成IR标记探针的方法以及如何进行irNorthern印迹。 总之，我们的irNorthern协议提供了一种方便的RNA检测方法。
【背景】Northern印迹分析是生物化学家和分子生物学家可用的基础技术之一。虽然采用了更新和更高通量的技术，但Northern印迹仍然是同时分析RNA大小和数量的强大且适应性强的方法。简而言之，用放射性磷-32（ 32 P）标记的DNA或RNA寡核苷酸与用RNA交联的膜杂交，随后使用放射自显影检测（Alwine et al。， 1977年）。尽管如此， 32 P的使用受制度监管，在使用过程中必须遵守安全预防措施（Jones，2005）。此外， 32 P探针寿命短，增加了使用成本。已经开发了使用与dNTP或NTP缀合的洋地黄毒苷（DIG）的替代方案来代替 32 P（Seibl ...
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