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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] The mechanisms of virulence and immunity are often governed by molecular interactions between pathogens and host proteins. The study of these interactions has major implications on understanding virulence activities, and how the host immune system recognizes the presence of pathogens to initiate an immune response. Frequently, the association between pathogen molecules and host proteins are assessed using qualitative techniques. As small differences in binding affinity can have a major biological effect, in vitro techniques that can quantitatively compare the binding between different proteins are required. However, these techniques can be manually intensive and often require large amounts of purified proteins. Here we present a simplified Surface Plasmon Resonance (SPR) protocol ...
[摘要] [摘要] 病原菌与宿主蛋白之间的分子相互作用是毒力和免疫机制的基础。对这些相互作用的研究对于理解毒力活动以及宿主免疫系统如何识别病原体的存在来启动免疫反应具有重要意义。通常，病原体分子和宿主蛋白之间的联系是用定性技术来评估的。由于结合亲和力的微小差异可能产生重大的生物学效应，因此需要能够定量比较不同蛋白质之间结合的体外技术。然而，这些技术可能是人工密集型的，并且通常需要大量纯化的蛋白质。在这里，我们提出了一个简化的表面等离子体共振（SPR）协议，它允许重复的并排定量比较不同蛋白质之间的结合，即使在结合亲和力无法可靠计算的情况下。我们用这种方法来评估稻瘟病菌的毒力蛋白（称为效应器）与宿主免疫受体的结合。这种方法代表了一种快速定量的方法来研究病原体分子如何与宿主蛋白质结合，只需要有限数量的蛋白质，并且具有高度的可重复性。虽然这种方法需要使用SPR仪器，但这些仪器通常可以通过许多机构的共享科学服务获得。因此，这项技术可以应用于任何旨在了解宿主-病原体相互作用的研究中，而不考虑研究者的专业知识。
[背景] ...
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