| A Transient Transfection-based Cell Adhesion Assay with 293T Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The in vitro cell adhesion assay is a quantitative method for measuring selective cell adhesion to specific proteins. Traditionally, cell adhesion assays employ purified protein immobilized on a solid glass or plastic surface. Here, we describe a transient 293T cell transfection-based cell adhesion assay to study selective cell adhesion of a specific cell type to a protein of interest. In this protocol, 293T cells are transfected with a mammalian expression plasmid containing mSiglec1 cDNA or an empty plasmid as a mock control and are then cultured to form a monolayer. Subsequently, these Siglec1-expressing and mock-transfected 293T cell monolayers are used for cell adhesion assays with GFP-expressing B16F10 cells. The number of GFP+ cancer cells adhering to each 293T monolayer is a ...
[摘要] [摘要]的体外细胞粘附分析是一种用于测量到特定蛋白选择性细胞粘附的定量方法。传统上，细胞粘附测定采用固定在固体玻璃或塑料表面上的纯化蛋白质。在这里，我们描述了基于瞬时293T细胞转染的细胞粘附试验，以研究特定细胞类型对目标蛋白质的选择性细胞粘附。在该协议中，将293T细胞用包含mSiglec1 cDNA的哺乳动物表达质粒或空质粒作为模拟对照转染，然后培养以形成单层。随后，将这些表达Siglec1和模拟转染的293T细胞单层用于表达GFP的B16F10细胞的细胞粘附测定。GFP +的数量 粘附在每个293T单层上的癌细胞是一种定量手段，用于比较癌细胞与Siglec1的选择性粘附性。该方法消除了表达和纯化目的蛋白以进行体外细胞粘附测定的需要，并且可以容易地用难以纯化的蛋白进行操作，同时保持其天然的原位结构。
关键词：细胞粘附试验，细胞粘附，癌细胞粘附试验，293T，瞬时转染，Siglec1，F荧光显微镜
[背景]细胞-细胞相互作用对于生物学过程，例如组织发育，再生，和临界形态发生，以及免疫应答和癌症转移（Gumbiner，1996 ...
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| In vitro Cultivation and Visualization of Malaria Liver Stages in Primary Simian Hepatocytes
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Human liver is the primary and obligatory site for malaria infection where sporozoites invade host hepatocytes. Malaria hepatic stages are asymptomatic and represent an attractive target for development of anti-malarial interventions and vaccines. However, owing to lack of robust and reproducible in vitro culture system, it is difficult to target and study this imperative malaria liver stage. Here, we describe a procedure that allow cultivation and visualization of malaria hepatic stages including dormant hypnozoites using primary simian hepatocytes. This method enables sensitive and quantitative assessment of different hepatic stages in vitro.
[摘要] [摘要 ] 人肝是疟疾感染的主要场所，子孢子侵入宿主肝细胞。疟疾的肝分期是无症状的，并且是开发抗疟疾干预措施和疫苗的有吸引力的目标。然而，由于缺乏健壮和可重现的体外培养系统，因此难以靶向和研究这种必不可少的疟疾肝阶段。在这里，我们描述了一种程序，该程序允许使用原代猿猴肝细胞培养和可视化疟疾肝阶段，包括休眠的次生子。这种方法可以对体外不同肝期进行灵敏和定量的评价。
[背景 ] 疟疾是女性的叮咬后传染给人类按蚊蚊子注入子孢子进入血流，其迁移到肝脏和侵入宿主的肝细胞。在肝细胞内部，子孢子进行第一轮无性繁殖并转化为多核肝裂殖体。完全成熟的肝脏裂殖体破裂并释放裂殖子，该裂殖子进入血流并感染红细胞（RBC）。在红细胞内部，寄生虫进行了第二轮无性繁殖，血液阶段的完成最终引起了与疟疾有关的临床症状。例外地，在所有疟原虫物种中，间日疟原虫，食蟹猴和卵圆形疟原虫的子孢子可产生休眠的肝形式，称为次生子孢子（Prudêncioet al。，2011）。
间日疟原虫是第二大主要疟原虫，在包括热带，亚热带和温带气候在内的所有疟疾物种中地理分布更广。消除间日疟原虫疟疾的最大挑战是由休眠的次生子激活引起的周期性疟疾复发，这些休眠的次生子启动了肝阶段增殖的发作（Wells ...
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| In vivo Mouse Mammary Gland Formation
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] For years, the mammary gland serves as a perfect example to study the self-renew and differentiation of adult stem cells, and the regulatory mechanisms of these processes as well. To assess the function of given genes and/or other factors on stemness of mammary cells, several In vitro assays were developed, such as mammospheres formation assay, detection of stem cell markers by mRNA expression or flow cytometry and so on. However, the capacity of reconstruction of whole mount in the cleared fat pad of recipient female mice is a golden standard to estimate the stemness of the cells. Here we described a step-by-step protocol for in vivo mammary gland formation assay, including preparation of “cleared” recipients and mammary cells for implantation, the surgery process and ...
[摘要] [摘要 ] 多年来，乳腺一直是研究成体干细胞的自我更新和分化以及这些过程的调控机制的完美例证。为了评估给定的基因和/或其他因素对乳腺细胞的干性，有几个函数体外测定法开发出来，如微球体由mRNA表达形成试验，干细胞标志物的检测或流式细胞术等。然而，在雌性小鼠清除的脂肪垫中整个坐骨的重建能力是估计细胞干性的黄金标准。在这里，我们描述了体内的分步操作方案 乳腺形成测定，包括准备“清除”的受体和用于植入的乳腺细胞，手术过程以及如何评估实验结果。结合通过基因编辑和/或药物处理对乳腺细胞的操作，该方案在乳腺干细胞和乳腺发育的研究中可能非常有用。
[背景 ] 作为哺乳动物最典型的器官之一，乳腺（MG）是外分泌腺，负责泌乳。MG的发育受某些性激素的控制，这些激素的水平精确地调节了MG在不同发育阶段的结构，细胞组成和功能变化（Henigighausen and Robinson，2005）。许多遗传和环境因素都参与了乳腺干细胞的调控和MG的发育。为了研究这些因素的功能和机理，已经开发了几种方法，特别是用于评估乳腺细胞的干性。先前的研究表明，只有MG的基底细胞而非管腔细胞能够在受体雌性小鼠清除的脂肪垫中重建上皮树，这表明乳腺干细胞仅存在于基底谱系中（Van Keymeulen 等，2011）。 ）。后来，包括我们在内的许多研究发现了乳腺干细胞的几种标志物（Prater ...
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