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Date:
2020-06-20
[Abstract] The intracellular pH of yeast is a tightly regulated physiological cue that changes in response to growth state and environmental conditions. Fluorescent reporters, which have altered fluorescence in response to local pH changes, can be used to measure intracellular pH. While microscopy is often used to make such measurements, it is relatively low-throughput such that collecting enough data to fully characterize populations of cells is challenging. Flow cytometry avoids this drawback, and is a powerful tool that allows for rapid, high-throughput measurement of fluorescent readouts in individual cells. When combined with pH-sensitive fluorescent reporters, it can be used to characterize the intracellular pH of large populations of cells at the single-cell level. We adapted microscopy and ...
[摘要] [摘要 ] 酵母的细胞内PH是对生长状态和环境条件响应发生变化的严格调节的生理线索。荧光报告基因可响应局部PH的变化而改变荧光，可用于测量细胞内的PH。常被用来进行此类测量，它是相对低吞吐量，从而收集足够的数据来充分体现群体的细胞是一种挑战。˚F 低流式细胞术避免了这种弊病，而且是一个强大的工具，允许对于快速，高通量测量单个细胞中的荧光读数。 当与pH敏感荧光报告相结合，它可以被用来表征的细胞内pH 大人口小号在单细胞的细胞level.We适于显微镜和流式细胞术为基础的方法来测量酵母胞内pH值。细胞可以可以在接近自然的条件下生长直到测量点为止，并且该协议可以在变化的环境条件下适用于单点或动态（时间分辨）测量。
[背景 ] 酵母的细胞内pH值与像活力和生长速率特性相关，和细胞内pH的调节消耗的相当大的比例的细胞活力的资源（Orij 等人，2011） 。然而，细胞内pH值可迅速变化并且是高度对环境敏感，因此对于细胞生理学的这一重要方面，采用快速，最小扰动的测量方法至关重要。
将目标化合物的局部浓度转换为荧光读数的基因编码生物传感器彻底改变了我们表征细胞内环境的能力，对于某些传感器，绝对荧光强度与读数相关，这在细胞内进行时可能是一个问题测量，因为荧光依靠小号都在该传感器的表达水平，而略有差异小区到小区，和特征兴趣。[R ...
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