|
Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] MYC family members, MYC, MYCN, and MYCL, are oncogenic transcription factors that regulate the expression of genes involved in normal development, cell growth, proliferation, metabolism, and survival. While MYC is amplified and/or overexpressed across a variety of tissue types, MYCN is often overexpressed in tumors of the nervous system (neuroblastoma and medulloblastoma) or with neuroendocrine features (neuroendocrine prostate cancer). Given recent reports that MYCN expression is also deregulated in a variety of non-neuronal tissue types, we investigated whether MYCN was also deregulated in triple-negative breast cancer (TNBC). In contrast to previous individual immuno-fluorescence (IF) stains against higher expressing MYC family isoform protein, we developed an IF stain to ...
[摘要] [摘要] MYC家族成员MYC、MYCN和MYCL是一类致癌转录因子，它们调节与正常发育、细胞生长、增殖、代谢和生存有关的基因的表达。虽然MYC在多种组织类型中扩增和/或过度表达，但MYCN通常在神经系统肿瘤（神经母细胞瘤和髓母细胞瘤）或具有神经内分泌特征（神经内分泌前列腺癌）中过度表达。鉴于最近的报道，MYCN在多种非神经元组织中的表达也被解除了调控，我们研究了MYCN在三阴性乳腺癌（TNBC）中是否也被解除了调控。与以往针对高表达MYC家族亚型蛋白的个体免疫荧光（IF）染色不同，我们开发了一种IF染色法来同时检测同一肿瘤细胞群中MYCN-和MYC表达细胞。我们的方法允许检测低水平的MYCN和MYC表达，并且可以与额外的蛋白质探针复合。在此，我们利用酪酰胺信号放大（TSA），提出了两种检测MYCN和MYC的方案，用于在福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤切片和生长后原位固定的细胞系中检测MYCN和MYC。
[背景] ...
|
|
Author:
Date:
2020-06-20
[Abstract] Eukaryotic RNA polymerase II transcribes all protein-coding mRNAs and is highly regulated. A key mechanism directing RNA polymerase II and facilitating the co-transcriptional processing of mRNAs is the phosphorylation of its highly repetitive carboxyl-terminal domain (CTD) of its largest subunit, RPB1, at specific residues. A variety of techniques exist to identify and quantify the degree of CTD phosphorylation, including phosphorylation-specific antibodies and mass spectrometry. Electrophoretic mobility shift assays (EMSAs) have been utilized since the discovery of CTD phosphorylation and continue to represent a simple, direct, and widely applicable approach for qualitatively monitoring CTD phosphorylation. We present a standardized method for EMSA analysis of recombinant GST-CTD ...
[摘要] [摘要 ] 真核RNA聚合酶II转录所有编码蛋白质的mRNA，并且受到高度调节。指导RNA聚合酶II并促进mRNA的共转录加工的关键机制是其高度重复的羧基末端结构域（CTD）的磷酸化。最大的亚基RPB1位于特定残基。存在多种鉴定和定量CTD磷酸化程度的技术，包括磷酸化特异性抗体和质谱法。自发现CTD磷酸化和本文提出了一种标准化的方法，用于EMSA分析被多种CTD激酶磷酸化的重组GST-CTD底物的EMSA方法，以及在变性/还原和还原条件下分析样品的策略。提供了半本地条件。此方法表示简单，直接，以及使用分子生物学实验室通用的设备监测重组底物中CTD磷酸化的可重现方法，该设备可轻松应用于下游分析，包括免疫印迹和质谱分析。
[背景 ] 真核生物RNA聚合酶II（RNAPII）产生所有蛋白质编码的mRNA，小核，小核仁，和许多微小RNA （杰罗尼莫等，2013;梅菲尔德。等，2016） 。各种机制中规范RNAPII活动要赋予特异性基因表达和促进生物处理工艺。在这些是直接翻译后修饰中RNAPII自己在形式的磷酸化（梅菲尔德等，2016） ，脯氨酰异构（梅菲尔德等，2015） ，甲基化（迪亚斯等人，2015年）和乙酰化（交银施罗德等，2013） 。一些研究最多的修饰是磷酸化的C端结构域RNAPII最大的亚基RPB1中（CTD） ...
|