| Live Intravital Intestine with Blood Flow Visualization in Neonatal Mice Using Two-photon Laser Scanning Microscopy
|
|
Author:
Yuhki Koike, Bo Li, Yong Chen, Niloofar Ganji, Mashriq Alganabi, Hiromu Miyake, Carol Lee, Alison Hock, Richard Wu, Keiichi Uchida, Mikihiro Inoue, Paul Delgado-Olguin and Agostino Pierro,
Date:
2021-03-05
[Abstract] This protocol describes a novel technique to investigate the microcirculation dynamics underlying the pathology in the small intestine of neonatal mice using two-photon laser-scanning microscopy (TPLSM). Recent technological advances in multi-photon microscopy allow intravital analysis of different organs such as the liver, brain and intestine. Despite these advances, live visualization and analysis of the small intestine in neonatal rodents remain technically challenging. We herein provide a detailed description of a novel method to capture high resolution and stable images of the small intestine in neonatal mice as early as postnatal day 0. This imaging technique allows a comprehensive understanding of the development and blood flow dynamics in small intestine microcirculation.
[摘要] [摘要]该协议描述了一种使用双光子激光扫描显微镜（TPLSM）研究新生小鼠小肠病理基础的微循环动力学的新技术。多光子显微镜技术的最新技术进步允许对不同器官（例如肝，脑和肠）进行活体分析。尽管取得了这些进步，但对新生啮齿类动物的小肠进行实时可视化和分析在技术上仍然具有挑战性。我们在此提供了一种新方法的详细描述，该方法最早可在出生后第0天捕获新生小鼠中小肠的高分辨率和稳定图像。这种成像技术可以全面了解小肠微循环中的发育和血流动力学。
[背景]
体内实时成像的发展
通过允许在实验动物上进行实时成像，最近的技术进步克服了常规组织学分析的局限性。与传统的组织学显微镜技术相比，活体检查方法可洞悉活组织中以前未知的形态发生和功能过程。此外，该信息可以实时获取，而替代技术仅限于时间快照。替代技术对确定在实验方案中的特定过程中获取图像的最佳时机具有额外的要求。
Ť ...
|
|
|
| Isolating Multiple Extracellular Vesicles Subsets, Including Exosomes and Membrane Vesicles, from Bovine Milk Using Sodium Citrate and Differential Ultracentrifugation
|
|
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Milk is a complex fluid that contains various types of proteins and extracellular vesicles (EVs). Some proteins can mingle with EVs, and interfere with their isolation. Among these proteins, caseins form micelles of a size comparable to milk EVs, and can thus be co-isolated with EVs. Preliminary steps that affect milk are crucial for EV isolation and impact the purity and abundance of isolated EVs. In the course of our previous works on cow’s milk EVs, we found that sodium citrate (1% final), which is a biocompatible reagent capable of breaking down casein micelles into 40-nm monomers, allowed the isolation of high quantities of EVs with low coprecipitation of caseins or other contaminating proteins. Using this protocol, we successfully separated different EV subsets, characterized in ...
[摘要] [摘要 ] 牛奶是一种复杂的流体，其中包含各种类型的蛋白质和细胞外囊泡（EVs），有些蛋白质会与EV混合在一起，并干扰其分离，在这些蛋白质中，酪蛋白形成的胶束大小与牛奶EV相当因此，可以将其与电动汽车共隔离。影响牛奶的初步步骤对于电动汽车的隔离，影响分离电动汽车的纯度和丰度至关重要。在我们以前对牛奶电动汽车的研究过程中，我们发现柠檬酸钠（最终含量为1％ ）是一种生物相容性试剂，能够将酪蛋白胶束分解为40 nm单体，可分离出大量的EV，而酪蛋白或其他污染蛋白的沉淀率却很低。 EV子集，深入表征其形态，蛋白质含量和小分子RNA富集模式。我们还能够描述其在小鼠肠道炎症模型中的生物学功能。具体来说，是从同一样品中分离出不同乳EV子集的培养基。更具体地说，我们着重介绍了使用柠檬酸钠作为标准化方法来分离和研究乳EV的方法及其在差分超速离心之外的分离技术的潜力。
[背景 ] 在我们以前的出版物（本穆萨等人。，2016 ，2017，2019b和2019c;本穆萨和普罗沃斯特，2019） ，我们强调，牛乳是包含细胞外无数的复杂流体囊泡。（EV）用的子集在这些之中，外泌体是多囊体（MVB）与细胞膜融合时释放的约100 nm囊泡，进行超速离心时，这些沉淀物的离心速度等于或高于100,000 xg （P100K，其中P代表沉淀）（Pieters 等。，2015） ...
|
|
|